[发明专利]检测龋齿蛋白的质谱模型及构建方法

说明书

技术领域

本发明涉及龋齿检测领域，为一种全新的非入侵性检测方法，在体外对龋齿进行早期的发现和检测。 

背景技术

蛀牙，有时也有人叫它虫牙，学名龋齿。其主要形成原因是牙菌斑。牙菌斑是牙齿表面的一层几乎无色的薄膜，含有造成龋齿的细菌。每次进食后，牙菌斑中的这些细菌会和食物中的糖分或淀粉发生化学作用，产生腐蚀牙齿的酸性物质。久而久之，牙齿的珐琅质便会破坏，形成比较脆弱的小蛀斑，若继续恶化则会形成牙洞，即蛀牙。所以，蛀牙是从小蛀斑发展而来的，不是真的有蛀虫或什么其他虫子，而是牙齿被逐渐腐蚀的结果。蛀牙在严重情况下，会导致牙齿的坏死和脱落。 

蛀牙是非常严重的问题。如果置之不理，蛀牙能破坏牙齿并破坏牙齿的中央神经，从而导致脓肿，也就是牙根顶端的局部感染。一旦脓肿形成，只能通过牙根管疗法、外科手术或拔除牙齿进行治疗。“牙疼不是病，疼起来真要命”一直是广为流传的一句俗语，但其实并不科学，因为牙疼是一种口腔疾病的症状，尤其是在得了蛀牙的情况下，那真是吃不下，睡不着，自己难受，家人也很心疼。千万不能有等一等，算了吧的观念。“牙疼不是病”的观点不仅是错误的，而且会耽误治疗，造成蛀牙恶化，牙齿坏死，而且还有可能导致更多蛀牙的产生。真要是到了疼得实在受不了的阶段，有时就连牙医也帮不上忙，那真是小洞不补，大洞吃苦。 

目前蛀牙或龋齿的检测仍然停留在临床表征检测水平，缺乏早期预警的技术手段。近年来也出现了一些新型检测技术，如：中国专利申请2007800288750、“唾液分析”公开了一种利用核磁共振谱技术鉴定口腔生物代谢物的方法，包括：收集个体唾液样本，从中获得个体数字化核磁共振光谱，将个体光谱与电脑中的参考模型进行比对，以间接测定口腔健康，其中光谱测定峰为甲醇、胆碱、亮氨酸等有机或无机物。由于该方法针对口腔健康相关的代谢物（如甲醇、胆碱、亮氨酸等有机或无机物），尽管其在一定程度上能表征该口腔健康的特征图谱，但由于所述代谢物与口腔健康并不存在唯一对应性，且所述口腔健康范围缺乏确定的标准，因此其得到的图谱实质上是上述各种分子的图谱集合，因此既需要处理和比对的图谱信息量过大，并且因待检分子过于庞大而导致其图谱特征性（即口腔健康特征性）偏低，只适用于基础研究而无法推广到实际应用中。 

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)是近年来发展起来的一种新型 的软电离生物质谱，其原理是用激光照射样品与基质形成的共结晶薄膜，基质从激光中吸收能量传递给生物分子，而电离过程中将质子转移到生物分子或从生物分子得到质子，而使生物分子电离的过程。TOF的原理是离子在电场作用下加速飞过飞行管道，根据到达检测器的飞行时间不同而被检测即测定离子的质荷比（M/Z）与离子的飞行时间成正比，检测离子。尽管MALDI-TOF的准确度高达0.1%～0.01%，远远高于目前常规应用的SDS电泳与高效凝胶色谱技术，但在疾病标志物尤其是龋齿的应用中仍然存在一些缺陷。作为最接近的现有技术，王国云等人报道蛋白质组学在口腔医学中的研究进展（中华口腔医学杂志，2006年05期），其中比较了口腔正常牙体组织和唾液蛋白质组学，并分析了口腔病原菌的可能的特征蛋白。然而，该报道仅仅公开了可以使用包括基质辅助激光解析电离飞行时间质谱在内的质谱分析法对口腔疾病进行研究，但并未公开任何具体的口腔疾病特征蛋白或标记物，因此国内迄今为止尚无采用MALDI-TOF-MS技术获得检测龋齿标志物或龋齿唾液特征蛋白的报道。 

因此目前需要新的龋齿的鉴定和分析方法（如质谱法）来实现快速、准确、廉价、便捷的分类结果。 

发明内容

本发明目的是为了建立一种对龋齿易感性标志物或龋齿唾液特征蛋白的检测技术，提出一种用于检测龋齿唾液特征蛋白的质谱模型及其制备方法。 

本发明的第一个目的是提供一种用于检测龋齿特征蛋白的唾液特征蛋白组合，由表征质荷比为3324.8m/z、3186.2m/z、3195.8m/z的龋齿特征蛋白组成，其中氨基酸序列分别如SEQ ID No.1、SEQ IDNo.2、SEQ ID No.3所示： 

SEQ ID No.1：Lys-Met-Thr-Glu-Ala-Gln-Glu-Asp-Gly-Gln-Ser-Thr-Ser-Glu-Leu-Ile-Gly-Gln-Phe-Gly-Val-Gly-Phe-Tyr-Ser-Ala-Phe-Leu-Val-Ala-Asp-Lys-Val；