[发明专利]一种生物碱类化合物的制备方法及其在制备抑制钙离子通道药物中的应用

说明书

技术领域：

本发明涉及从一种从海洋放线菌Streptomyces nigrescens SCSIO ZJ49的发酵产物中分离一种具有钙离子通道活性的生物碱类化合物Methyl saphenate的制备方法及其在制备抑制钙离子通道药物中的应用，特别是在制备抑制L-型电压门控性钙离子通道药物，用于治疗钙离子通道依赖性心律失常、心绞痛、高血压等疾病中。

背景技术：

钙通道是药物疗法的重要靶点，抑制钙离子通道药物是强力的血管舒张药并牵涉许多病理学病况，包括原发性高血压、充血性心力衰竭、绞痛、心律不齐、偏头痛和疼痛。钙通道是细胞膜上的孔状蛋白，能允许钙离子（Ca²⁺）和钡离子（Ba²⁺）顺电化学梯度方向进入细胞内。根据激活方式不同，将钙通道分为电压依赖式钙通道（voltage-dependent Ca²⁺channels，VDCC）和受体操纵式钙通道（receptor-operated Ca²⁺channels，ROCC），其中VDCC是Ca²⁺内流的主要途径。而根据电生理和药理学特性不同，又将VDCC分为L、T、N、P/Q和R等亚型，不同亚型的通道在电压和时间依赖性、电导和药理等方面的特性各不相同，其中L-型钙通道，是细胞兴奋时外钙内流的主要途径。Ca²⁺作为重要的细胞内第二信使，通过L-型钙通道调节许多细胞反应与活动，并参与肌肉收缩、心血管系统功能调节等。

本发明的生物碱类化合物Methyl saphenate，其化学结构如式（1）所示，公开于文献：A.Geiger,W.Keller-Schierlein,M.Brandl and H.Zahner,Metabolites of microorganisms.247.Phenazines from Streptomyces antibioticus,strain Tu2706.J Antibiot(Tokyo)1988,41,1542-1551.

发明内容：

本发明的第一个目的是提供一种如式（1）所示的生物碱类化合物Methyl saphenate的制备方法。

本发明的如式（1）所示的生物碱类化合物Methyl saphenate的制备方法，其特征在于，如式（1）所示的生物碱类化合物Methyl saphenate是从海洋放线菌Streptomyces nigrescens SCSIO ZJ49的发酵培养物中制备的。

优选，其具体步骤为：

a、将海洋放线菌Streptomyces nigrescens SCSIO ZJ49的发酵产物的上清发酵液和菌丝体分离开，上清发酵液用丁酮萃取，丁酮萃取液浓缩得发酵液浸膏；菌丝体用丙酮萃取，丙酮萃取液浓缩得菌体浸膏，合并发酵液浸膏和菌体浸膏得浸膏；

b、浸膏经正相硅胶柱层析，以氯仿/甲醇为洗脱剂，从体积比100/0，98/2梯度洗脱，顺序得馏分A1-A2，合并馏分A1，A2，经正向硅胶柱层析，以石油醚/乙酸乙酯为洗脱剂，从体积比100/0，80/20，70/30梯度洗脱，顺序得馏分B1-B3，合并B2和B3，经反相中压层析纯化后得到化合物Methyl saphenate。

所述的反相中压层析，其层析条件为：流速10mL/min，检测波长236nm，A相-水，B相-甲醇，0～50min，A/B：80/20～15/85进行线性梯度洗脱；50-60min以100%B相进行等梯度洗脱，收集在52min出峰的组分，旋蒸干燥，重复上述反相中压层析，经二次纯化后，得到纯品化合物Methyl saphenate。

所述的海洋放线菌Streptomyces nigrescens SCSIO ZJ49的发酵产物优选通过以下方法制备的：