[发明专利]靶向肿瘤相关基因的siRNA分子及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及靶向肿瘤相关基因的siRNA分子，尤其是指靶向NET-1基因及同时靶向NET-1基因和Cortactin基因的siRNA分子及其应用。

背景技术

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是由双链RNA(double-strand RNA，dsRNA)引发其同源信使RNA(messenger RNA，mRNA)酶解的一种转录后基因沉默形式(Nature.1998，391：806-811)。长双链RNA进入细胞后，被Dicer酶结合并切割。Dicer酶的切割产物长度通常为20～25bp，且在每条链的3’末端有2个核苷酸悬垂的小干扰RNA(small interference RNA，siRNA)。siRNA的一条链掺入到RNA-诱导的沉默复合物中(RNA-induced silencing complex，RISC)，与互补RNA的序列配对。RISC首先介导siRNA双链解旋，与RISC耦合的单链的siRNA以序列特异的方式与靶mRNA结合，之后由RISC的催化组分切割靶mRNA。切割靶mRNA可以抑制其翻译，最终抑制该基因的表达。现已被证实在多种病毒感染性疾病和肿瘤的治疗中具有极大的潜力，是理想的阻断基因表达的治疗手段。

RNAi在医药领域有广阔的应用前景，如抗病毒、抗肿瘤和抗炎症等。双链干扰核酸可设计成能被Dicer酶剪切的称做Dicer底物的长双链形式，或者是短的、不需Dicer酶剪切直接作为RISC底物的形式。合成的双链RNA与目的基因序列互补，导入细胞或生物体后，被内源的遗传物质识别，激活RNAi途径。利用这种机制，RNAi使靶基因的表达水平急剧下降。

RNAi技术开辟了一个全新的治疗领域，目前国际上已有数十种siRNA药物进入临床阶段。其中有应用siRNA治疗老年性黄斑变性、糖尿病黄斑水肿、呼吸道合胞病毒病、实体肿瘤、肝癌、以及急性肾损伤等疾病。

在最近的研究中，陈莉等人报道了NET-1和Cortactin的蛋白在HCC组织中相对癌旁组织显著过表达。前期研究表明NET-1的表达与细胞增殖有关，显著上调癌症的形成(Chen L等.Tumori.2010，96：744-750)。该结果显示，NET-1的表达和功能可能会成为癌症发生发展的潜在靶标。

最新报道的由EMS1(细胞骨架重组相关基因)编码的Cortactin(皮层肌动蛋白结合蛋白)，与癌症转移相关的(Kellye C.CellAdhesion&Migration5：2，187-198；March/April2011)。Cortactin可以结合到Arp2/3复合物上，激活Arp2/3复合物介导的肌动蛋白聚合，促进细胞迁移(Kowalaki JR.J Cell Sci，2005，118(Pt1)：79-87)。以往的研究表明，Cortactin表达与门静脉癌栓和肝外转移显着相关，说明Cortactin的高表达可能是肝癌侵袭性增加的因素之一。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供靶向NET-1基因的siRNA分子以及同时靶向NET-1和Cortactin基因的siRNA分子及其应用。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案是提供了一种靶向NET-1基因的siRNA分子，其特征在于，其序列为：

正义链：5’-CCACAAUGGCUGAGCACUUNn-3’(SEQ ID NO：1)，

反义链：5’-AAGUGCUCAGCCAUUGUGGNn-3’(SEQ ID NO：2)；

其中，N是胞嘧啶C、鸟嘌呤G、腺嘌呤A、胸腺嘧啶T、脱氧胞嘧啶dC、脱氧鸟嘌呤dG、脱氧腺嘌呤dA或脱氧胸腺嘧啶dT；n代表N的个数，n是0～2的整数。

换言之，上述双链siRNA分子的主干序列为：

正义链：5’-CCACAAUGGCUGAGCACUU-3’(SEQ ID NO：8)，

反义链：5’-AAGUGCUCAGCCAUUGUGG-3’(SEQ ID NO：9)。

本发明还提供了一种同时靶向NET-1和Cortactin基因的一链多靶siRNA分子，其特征在于，由正义链、反义链1和反义链2组成，其序列为：

正义链：

5’-CCACAAUGGCUGAGCACUUAGAACAAGACCGAAUGGAUANn-3’(SEQ ID NO：5)，