[发明专利]无菌斑马鱼的生产方法

权利要求书

1.无菌斑马鱼的生产方法，包括如下步骤：

（1）将离体的斑马鱼受精卵置于AB-GZM溶液中，于25-29℃培养3-8h；

（2）将步骤（1）处理后的所述受精卵用所述AB-GZM溶液进行漂洗；

（3）将步骤（2）漂洗后的所述受精卵置于浓度为0.005g/L的聚维酮碘水溶液中，浸泡1-2min；

（4）将步骤（3）浸泡后的所述受精卵用无菌GZM溶液进行漂洗；

（5）将步骤（4）漂洗后的所述受精卵用漂白剂漂白10-20min；

（6）将步骤（5）漂白后的所述受精卵用所述无菌GZM溶液进行漂洗，漂洗后将所述受精卵置于所述无菌GZM溶液中培养，培养温度为25-29℃，光周期为L10：D14至L14：D10，直至所述受精卵孵化得到幼体鱼；

（7）对所述幼体鱼每天进行所述无菌GZM溶液的半量换液培养，直至所述幼体鱼长成为目的大小的斑马鱼，从所述目的大小的斑马鱼中获得目的无菌斑马鱼；

所述GZM溶液的溶剂为水，溶质为海盐；所述海盐在所述GZM溶液的含量为每升所述GZM溶液中含有60mg所述海盐；

所述AB-GZM溶液的溶剂为水，溶质及其浓度如下：250ng/mL的两性霉素B、5μg/mL的卡那霉素、100μg/mL的氨苄霉素、10U/ml的青霉素、10U/ml的链霉素、59μg/mL的海盐。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤（1）中，所述培养的温度为28.5℃；或

所述培养的时间为4.5h。

3.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于：步骤（3）中，所述浸泡的时间为1min。

4.根据权利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于：步骤（5）中，所述漂白的时间为15min。

5.根据权利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于：步骤（6）中，所述培养的温度为28.5℃；或

所述培养的光周期为L14:D10。

6.根据权利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于：步骤（6）中，将所述受精卵置于所述无菌GZM溶液中培养，培养密度为每100mL所述无菌GZM溶液中培养40-60个所述受精卵。

7.根据权利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于：步骤（7）中，从所述目的大小的斑马鱼中获得所述目的无菌斑马鱼的方法包括如下步骤：对已用于培养所述目的大小的斑马鱼的所述GZM溶液进行无菌性检测，经检测无菌的所述GZM溶液中培养的所述目的大小的斑马鱼即为目的无菌斑马鱼。

8.根据权利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于：在所述方法中，还包括自所述受精卵后第5天对孵化所得斑马鱼进行喂食的步骤；所喂食物为无菌的四膜虫。

9.AB-GZM溶液，其特征在于：所述AB-GZM溶液的溶剂为水，溶质及其浓度如下：250ng/mL的两性霉素B、5μg/mL的卡那霉素、100μg/mL的氨苄霉素、10U/ml的青霉素、10U/ml的链霉素、59μg/mL的海盐。

10.权利要求9所述AB-GZM溶液在生产无菌鱼中的应用；

所述无菌鱼具体为无菌斑马鱼。