[发明专利]氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用

说明书

技术领域

本发明属于微生物农药领域，具体涉及氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用；以及利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法；此外还涉及一种芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂及其制备方法。

背景技术

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是土壤中一类比较重要的生防微生物群体，能够防治多种植物病害（何礼远.生物防治通报,1985,1(3)：28-31；Yu G Y等，Soil Biology and Biochemistry.2002,34:955-963）。芽孢是芽孢杆菌在发酵后期产生的一类抗逆性较强的休眠体（沈萍等，微生物学，高等教育出版社.2006,55-60），常被作为有效成分制作成微生物农药，但是相对于化学农药，以芽孢为有效成分的微生物农药货架期相对较短，而芽孢的耐热能力是影响其货架期的主要因素之一。

芽孢的耐热性能除了受相关基因的控制外，外界环境中金属离子、温度、酸碱度等均能影响芽孢的形成与性能，其中金属离子Ca²⁺、Mn²⁺、Fe²⁺对芽孢的耐热性能有不同程度的提高效果（Granger A C等.Applied and Environmental Microbiology.2011,77(1):32-40）。因此，提高枯草芽孢杆菌芽孢的耐热性是延长相应的微生物农药货架期的有效途径之一。

发明内容

针对枯草芽孢杆菌微生物农药货架期短的问题，本发明目的在于提供氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用。

本发明另一目的在于提供利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法。

本发明第三目的在于提供一种芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂。

本发明第四目的在于提供上述芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂的制备方法。

本发明的目的通过以下的技术方案实现：

氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用。

本发明利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，包括向枯草芽孢杆菌发酵培养前的发酵培养基或者发酵培养结束后的发酵液中添加MgCl₂，搅拌均匀。

上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，按照每100mL发酵培养基中添加0.1g～0.3g MgCl₂的比例向发酵培养基中添加MgCl₂；其中所述的发酵培养基的组成成分及质量百分比为：葡萄糖2%～2.5%，可溶性淀粉3%～5%，蛋白胨0.1%～0.2%，NaNO₃1%～2%，K₂HPO₄0.2%～0.4%，MgSO₄·7H₂O0.1%～0.2%，CaCO₃0.05%～0.15%，其余为水。

上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，按照每100mL发酵液中添加0.1g～0.3g MgCl₂的比例向发酵液中添加MgCl₂；其中所述的发酵液中枯草芽孢杆菌的总菌数为1.0×10⁹～1.0×10¹⁰个/mL，其中芽孢约占枯草芽孢杆菌总菌数的90％。

所述的枯草芽孢杆菌是指以芽孢作为微生物农药有效成分的枯草芽孢杆菌；如BAB-1（2007年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为：CGMCC No.2099）。

上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法中，其所述的发酵液按照如下方法制备：

（1）菌种活化

将低温保存的枯草芽孢杆菌菌种在LB培养基固体平板上划线，然后在28℃～32℃下培养20～24小时，得活化菌种；

（2）种子液制备

按照将一接种环活化菌种接种于100mL种子液培养基的比例将活化菌种接种于种子液培养基中，在30℃～32℃、170～210r/min条件下振荡培养10～15h，得种子液；

（3）发酵液制备

按照体积百分比为3%～5%的比例将步骤（2）所得的种子液接种到发酵培养基中，在30℃～32℃、pH7.0～7.5、170～210r/min条件下振荡培养40～50h，得发酵液。

上述利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法中所述的LB培养基、种子液培养基、发酵培养基按照常规方法制备。