[发明专利]氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用

权利要求书

1.氯化镁在提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性上的应用。

2.利用氯化镁提高枯草芽孢杆菌芽孢耐热性的方法，其特征在于向枯草芽孢杆菌发酵培养前的发酵培养基或者发酵培养结束后的发酵液中添加MgCl₂，搅拌均匀。

3.按照权利要求2所述的方法，其特征在于按照每100mL发酵培养基中添加0.1g～0.3g MgCl₂的比例向发酵培养基中添加MgCl₂；其中所述的发酵培养基的组成成分及质量百分比为：葡萄糖2%～2.5%，可溶性淀粉3%～5%，蛋白胨0.1%～0.2%，NaNO₃1%～2%，K₂HPO₄0.2%～0.4%，MgSO₄·7H₂O0.1%～0.2%，CaCO₃0.05%～0.15%，其余为水。

4.按照权利要求2所述的方法，其特征在于按照每100mL发酵液中添加0.1g～0.3g MgCl₂的比例向发酵液中添加MgCl₂；其中所述的发酵液中枯草芽孢杆菌的总菌数为1.0×10⁹～1.0×10¹⁰个/mL，其中芽孢约占枯草芽孢杆菌总菌数的90％。

5.按照权利要求2或4所述的方法，其特征在于所述的发酵液按照如下方法制备：

（1）、将低温保存的枯草芽孢杆菌菌种在LB培养基固体平板上划线，然后在28℃～32℃下培养20～24小时，得活化菌种；

（2）、按照将一接种环活化菌种接种于100mL种子液培养基的比例将活化菌种接种于种子液培养基中，在30℃～32℃、170～210r/min条件下振荡培养10～15h，得种子液；

（3）、按照体积百分比为3%～5%的比例将步骤（2）所得的种子液接种到发酵培养基中，在30℃～32℃、pH7.0～7.5、170～210r/min条件下振荡培养40～50h，得发酵液。

6.按照权利要求5所述的方法，其特征在于所述的LB培养基的组成成分及质量百分比为：酵母膏0.5%，胰蛋白胨1%，氯化钠0.5%，琼脂1.2%，其余为水；所述的种子液培养基的组成成分及质量百分比为：葡萄糖0.5%，酵母膏0.5%，蛋白胨1%，氯化钠0.5%，其余为水；所述的发酵培养基的组成成分及质量百分比为：葡萄糖2%～2.5%，可溶性淀粉3%～5%，蛋白胨0.1%～0.2%，NaNO₃1%～2%，K₂HPO₄0.2%～0.4%，MgSO₄·7H₂O0.1%～0.2%，CaCO₃0.05%～0.15%，其余为水。

7.一种芽孢耐热性强的枯草芽孢杆菌菌剂，其特征在于按照如下方法制备：向枯草芽孢杆菌发酵培养前的发酵培养基或者发酵培养结束后的发酵液中添加MgCl₂，搅拌均匀。

8.按照权利要求7所述的枯草芽孢杆菌菌剂，其特征在于按照每100mL发酵培养基中添加0.1g～0.3g MgCl₂的比例向发酵培养基中添加MgCl₂；其中所述的发酵培养基的组成成分及质量百分比为：葡萄糖2%～2.5%，可溶性淀粉3%～5%，蛋白胨0.1%～0.2%，NaNO₃1%～2%，K₂HPO₄0.2%～0.4%，MgSO₄·7H₂O0.1%～0.2%，CaCO₃0.05%～0.15%，其余为水。

9.按照权利要求7所述的枯草芽孢杆菌菌剂，其特征在于按照每100mL发酵液中添加0.1g～0.3g MgCl₂的比例向发酵液中添加MgCl₂；其中所述的发酵液中枯草芽孢杆菌的总菌数为1.0×10⁹～1.0×10¹⁰个/mL，其中芽孢约占枯草芽孢杆菌总菌数的90％。

10.按照权利要求7所述的枯草芽孢杆菌菌剂，其特征在于所述的发酵液，按照如下方法制备：

（1）、将低温保存的枯草芽孢杆菌菌种在LB培养基固体平板中划线，然后在28～32℃下培养20～24小时，得活化菌种；

（2）、按照一接种环活化菌种接种于100mL种子液培养基的比例将活化菌种接种于种子液培养基中，在30℃～32℃、170～210r/min条件下振荡培养10～15h，得种子液；

（3）、按照体积百分比为3%～5%的比例将步骤（2）所得的种子液接种到发酵培养基中，在30℃～32℃、pH7.0～7.5、170～210r/min条件下振荡培养40～50h，得发酵液。