[发明专利]具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖及其制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种中药提取物，具体涉及一种具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖及其制备方法与应用。

背景技术

黄蜀葵花为锦葵科黄蜀葵(Abelmoschus manihot L.Medicus)的干燥花冠，具有清热解毒、化瘀、消炎镇痛等功效，主治诸恶疮、水肿、小便淋痛、烫火伤、腮腺炎等疑难杂症。目前，对黄蜀葵花的相关研究主要集中在黄酮类化合物的药学及药效学研究；然而黄蜀葵花中另一类重要的化学成分多糖类物质的研究相对滞后。目前尚未见系统地完成黄蜀葵花多糖类物质制备、结构鉴定及药理活性分析的报道。大量研究资料表明，天然多糖具有很好的抗肿瘤生物活性，因此非常有必要系统地完成黄蜀葵花多糖类物质制备、结构鉴定及药理活性分析，开发出一种具有抗肿瘤活性且不良反应低的黄蜀葵花多糖。

发明内容

发明目的：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种结构新颖，抗肿瘤活性强，不良反应低的黄蜀葵花多糖，本发明另一个目的是提供该黄蜀葵花多糖的制备方法和其应用。

技术方案：为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：

一种具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖，该多糖由摩尔比为1:0.91:2.14:1.0的β-D-吡喃葡萄糖、α-D-吡喃甘露糖、α-D-半乳糖和α-L-吡喃岩藻糖构成，该多糖的基本单元的结构式

该多糖的分子量为8867。

本发明提供的具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖的制备方法，包括以下步骤：

(1)脱脂处理

称取黄蜀葵花药材，用总药材总量8~16倍的无水乙醇，在50~70℃水浴温浸泡6~12小时，趁热抽滤，得药渣挥尽乙醇后60~70℃干燥，得脱脂黄蜀葵花药材；

(2)粗多糖的提取

取步骤(1)脱脂后的黄蜀葵花药材，加入药材总重量8~12倍量的水，在60~70℃温度下浸渍提取1~3次，每次6~8h，滤过，合并滤液，在2000~3000rpm离心10~20min，得上清液在65~70℃下减压浓缩至原体积的1/10，然后加浓度为95%乙醇使乙醇的浓度达70%，然后再4℃静置24h后滤取沉淀，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，减压干燥，得黄蜀葵花粗多糖；

(3)粗多糖脱蛋白质

取步骤(2)制备得到的黄蜀葵花粗多糖，完全溶解于蒸馏水中，然后加入浓度30%的三氯乙酸溶液至三氯乙酸终浓度为3%，在4℃静置5~8h，然后3000~3500rpm离心10~15min，除去沉淀，得上清液用NaOH溶液调pH至中性，减压浓缩，浓缩液透析，截取分子量8000Da以上成分，得除蛋白的粗制多糖溶液；

(4)DEAE-52纤维柱层析

取步骤(3)脱蛋白后的粗多糖溶液，上样于DEAE-52纤维层析柱中，然后分别用：蒸馏水、0.05mol/L NaCl、0.1mol/L NaCl、0.25mol/L NaCl、0.5mol/L NaCl进行分段洗脱，控制流速0.5mL/min，分别收集洗脱液，采用硫酸-苯酚法跟踪检测多糖部位，合并多糖洗脱部位；

(5)SephadexG-100凝胶柱层析

取步骤(4)经DEAE-52纤维柱纯化后的黄蜀葵花多糖上SephadexG-100凝胶柱，用蒸馏水洗脱，控制流速0.3mL/min，收集洗脱液，采用硫酸-苯酚跟踪检测，得精制的黄蜀葵花多糖。

本发明提供的具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖在制备防治肿瘤药物中的应用。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖在制备防治肿瘤药物中的应用，所述的肿瘤为人胃癌或人肝癌。

作为优选方案，以上所述的具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖在制备防治肿瘤药物中的应用，把黄蜀葵花多糖和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或微囊剂剂型的药物。

本发明在制成片剂时把有效成分细粉添加载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。在制成胶囊剂时，把有效成分细粉添加载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。本发明在制成颗粒剂时，把有效成分细粉和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。

有益效果：本发明提供的具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖和现有技术相比具有有点：

1、本发明通过大量实验优选提取分离工艺，首先采用水提醇沉法得到粗多糖，再脱蛋白，然后DEAE-52纤维素树脂和SephadexG-100凝胶树脂联用进行纯化，制得纯度高的黄蜀葵花多糖，经过结构测定为一种新的多糖。