[发明专利]一种去氢臭葱素的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于天然植物萃取领域，具体涉及一种去氢臭葱素的制备方法。

背景技术

去氢臭葱素（Dehydroodorin），分子式C₁₈H₂₂N₂O₂，分子量298.39。去氢臭葱素是从楝科(Meliaceae)米仔兰叶中萃取分离的一种吡咯生物碱类化合物。实验研究表明，去氢臭葱素具有细胞毒活性。对P388淋巴白血病细胞的ED50为3.86μg/ml。

米仔兰微温，归肺、胃、肝经，具有祛风湿、散瘀肿的功效，主治风湿关节痛、跌打损伤、痈疽肿毒等症。米仔兰枝叶含三萜类成分米仔兰醇（aglaiol)，米仔兰酮二醇（aglaiondiol)，米仔兰三酸（aglaitriol)及其异构体和米仔兰酮（aglaione)，并含生物碱：米仔兰碱（odorine)，米仔兰酸碱（odorinol)，去氢臭葱素（Dehydroodorin），以及苯并呋喃类化合物洛克米兰醇（rocaglaol)，洛克米兰酰胺（rocaglamide)，去甲基洛克米兰酰胺（desmethylrocaglamide)和洛克米兰酸甲酯（methyl rocaglate)，另含一种嘧啶酮类化合物米仔兰啶（aglaidin)。米仔兰叶全年可采，资源丰富。

目前，国内尚未见去氢臭葱素的萃取纯化方法方面的报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种去氢臭葱素的制备方法，该方法操作简单、生产周期短、安全环保，可快速大量分离高纯度去氢臭葱素。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

（1）萃取：取米仔兰叶粉碎成粗粉，与8-12倍量70-95%的乙醇溶液混合后，空化混悬20-50min，进行负压空化混悬固液萃取1-2次，得到萃取液；

（2）氧化铝柱层析：上述萃取液浓缩至浸膏，加氧化铝拌匀、干燥后装柱，用氯仿-丙酮混合溶液洗脱，薄层检测，收集去氢臭葱素流分，浓缩；

（3）高速逆流色谱仪分离：上述浓缩液采用高速逆流色谱仪分离，以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.2MHCl为两相溶剂系统，紫外检测器在线监测，收集去氢臭葱素组分，将洗脱液旋转蒸发浓缩，得去氢臭葱素粗晶；

（4）重结晶：将去氢臭葱素粗晶用甲醇重结晶，冷冻干燥得到高纯度去氢臭葱素晶体。

步骤（1）所述乙醇溶液浓度为85%。

步骤（2）所述氧化铝为80-120目，氯仿-丙酮体积比为1:1，用量为柱体积的4-6倍。

步骤（3）所述正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.2MHCl体积比为（2-3.5）：（4-7）：（1-3）：（8-11），紫外检测波长为282nm。

本发明的优点在于：1）操作简单、耗时短，易于产业化放大；2）采用负压空化混悬固液萃取的方法对植物原料中的蓖麻碱进行提取，时间短，效率高；3）柱层析和高速逆流色谱等步骤，易操作，可以快速得到高纯度产品；4）具有较高的经济效益和学术价值，本发明所得产品纯度高，可为去氢臭葱素的进一步开发提供药理原料和实践支持。

具体实施方式：

下面结合具体实施例对本发明进一步说明：

实施例1：

取米仔兰叶1kg，粉碎成粗粉，与8L85%的乙醇溶液混合后，空化混悬50min，进行负压空化混悬固液萃取2次，得到萃取液，萃取液减压回收试剂得浸膏，向浸膏中加氧化铝（120目）拌匀、干燥后装柱，用6倍柱体积的氯仿-丙酮（1:1）混合溶液洗脱，薄层检测，收集去氢臭葱素流分，浓缩得粗品。取正己烷、乙酸乙酯、甲醇、0.2MHCl按体积比为3：5：3：8混合，静置分层，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节900r/min，取下相溶解粗品注入色谱仪，紫外在线检测，检测波长为282nm，收集目标成分，减压回收试剂得去氢臭葱素粗晶，用甲醇重结晶，冷冻干燥得到高纯度去氢臭葱素晶体，经HPLC检测，纯度97.5%。

实施例2：