[发明专利]一种提取纯化桧黄素的方法

说明书

技术领域

本发明属于天然药物领域，具体而言，本发明涉及一种提取纯化桧黄素的方法。

背景技术

桧黄素（Hinokiflavone）是从漆树科植物野漆Rhus succedanea L.的核果中提取分离的一种黄酮类化合物，分子式C₃₀H₁₈O₁₀，结构式：

。

桧黄素具有细胞毒活性，对KB细胞的ED₅₀为2.0μg/ml；具有抗病毒活性，在Raji细胞中抑制EB病毒基因的表达；能抑制促凝血活性，IC₅₀为0.068μM。

野漆的根、叶及果入药，有清热解毒、散瘀生肌、止血、杀虫之效，治跌打骨折、湿疹疮毒、毒蛇咬伤，又可治尿血、血崩、白带、外伤出血、子宫下垂等症。

现有技术多是采用溶剂萃取黄酮的方法，所用的有机溶剂有甲醇、乙酸乙酯、丙酮等。存在的缺点是有机溶剂用量大，种类多，对环境有较大影响。目前，国内很少见桧黄素的研究报道，该物质的相关研究尚处于起步阶段。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种适用于规模化生产、产品纯度高的提取纯化桧黄素的方法。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：

（1）以野漆核果为原料，进行干燥、粉碎，采用超临界二氧化碳技术萃取野漆核果中的油脂类物质；

（2）残渣加7-10倍（V/W）70-90%丙酮溶液进行超声循环提取1-3次，每次30-50min，合并提取液；

（3）提取液浓缩后上聚酰胺树脂柱，先用水和35%乙醇溶液洗脱，再用70%乙醇溶液洗脱，收集70%乙醇洗脱液；

（4）洗脱液浓缩，上硅胶短粗柱，柱径高比为1:5-8，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液为洗脱剂，收集洗脱液，浓缩，放置结晶；

（5）分出结晶，丙酮-正己烷混合溶剂重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得桧黄素。

所述步骤（1）中超临界二氧化碳萃取温度为38-50℃，压力为25-32MPa，萃取时间为20-40min。

所述步骤（4）中乙酸乙酯-丙酮混合溶液体积比为1:6-15。

所述步骤（5）中丙酮-正己烷混合溶剂体积比为1.5:1。

综上所述，本发明存在以下优点：

（1）采用超临界二氧化碳萃取技术脱除油脂类物质，快速、高效；

（2）采用超声循环提取的方法，提取效率高；

（3）采用大孔树脂和硅胶短粗柱层析后进行结晶，从而获得含量98%以上的桧黄素，成本低，分离效果好；

（4）本发明所用试剂乙酸乙酯、丙酮等，可替代通常柱层析采用的氯仿、甲醇，降低毒性和污染。

具体实施方式：

下面将结合具体实施方式对本发明做进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。

实施例1：

取野漆核果粗粉500g，采用超临界二氧化碳技术萃取野漆核果中的油脂类物质，萃取温度为38℃，压力为25MPa，萃取时间为20min，残渣加10倍（V/W）90%丙酮溶液进行超声循环提取1次，每次30min，合并提取液，浓缩后上聚酰胺树脂柱，先用水和35%乙醇溶液洗脱，再用70%乙醇溶液洗脱，收集70%乙醇洗脱液，浓缩，与200目的硅胶按重量比1:1拌匀、阴干，上硅胶短粗柱，柱径高比为1:5，以乙酸乙酯-丙酮混合溶液为洗脱剂，依次按1:6、1:10、1:15体积比进行洗脱，收集含桧黄素的洗脱液，回收试剂，将所得桧黄素浓缩液置于结晶罐中静置20小时使其结晶，过滤，分出结晶，采用丙酮-正己烷（1.5:1）混合溶剂重结晶，滤出结晶，冷冻干燥即得桧黄素0.35g，纯度为98.3%。

实施例2：