[发明专利]一种合成利拉鲁肽的方法

说明书

技术领域

本发明涉及医药合成领域，具体涉及一种合成利拉鲁肽的方法。

背景技术

利拉鲁肽，英文名为Liraglutide，是丹麦诺和诺德公司研制出的一种治疗II型糖尿病的药物。利拉鲁肽是一种人胰高糖素样肽-1（GLP-1）类似物，其作为GLP-1受体激动剂能起到良好的降低血糖作用，肽序如下：

NH₂-His-Ala-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala-Lys（N-ε-（N-α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl））-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Val-Arg-Gly-Arg-Gly-COOH

利拉鲁肽与天然GLP-1分子结构相比有一个氨基酸差异，并增加了一个16碳棕榈酰脂肪酸侧链，与天然人GLP-1有95%同源性。并且由于脂肪酸侧链的存在，其分子不易被DPP-IV降解，并能与白蛋白结合因而有较高的代谢稳定性。

在利拉鲁肽的现有合成方法中，诺和诺德公司主要是通过基因重组技术，利用酵母生产利拉鲁肽，但是国内无法得到酵母菌种进行生产。专利US6268343B1、US6458924B2以及文献“Journal of Medicinal Chemistry 43，1664-1669，2000”均公开了利用中间体GLP-1(7-37)-OH和N^α-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu来制备利拉鲁肽的方法，但是这三种现有技术中，中间体GLP-1(7-37)-OH均需要反相HPLC纯化，再在液相条件下与N^α-alkanoyl-Glu(ONSu)-OtBu反应，并且由于GLP-1(7-37)-OH N端未保护以及侧链保护基全部脱除，会导致产生许多杂质，难以纯化，操作繁琐，周期长，废液多，不利于环保，并且两步纯化，需花费大量乙腈，成本高昂，不利于大规模生产等。

中国专利CN102286092A公开了一种全固相合成方法，采用2-CTC树脂或王树脂，按照利拉鲁肽肽序逐个偶联氨基酸，最后经过反向纯化得到利拉鲁肽，其不需要两步纯化而且杂质较少，优于上述几种现有制备方法。但是，这种方法需要逐个偶联氨基酸，合成周期长，总收率较低，仅为15%左右（参见CN102286092A实施例12-14），仍需要进一步提高。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种合成利拉鲁肽的方法，使得本发明所述方法能够提高其总收率。

为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

一种合成利拉鲁肽的方法，包括以下步骤：

步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、His侧链上以及Glu侧链上偶联有保护基的多肽片段1；

固相合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Thr侧链上、Ser侧链上以及Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段2；

固相合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列N端、Ser侧链上、Tyr侧链上以及Glu侧链上偶联有保护基的多肽片段3；

固相合成在SEQ ID NO:4所示氨基酸序列N端、Gln侧链上、Glu侧链上偶联有保护基以及在Lys侧链上偶联有N^α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl-OtBu的多肽片段4；

固相合成在SEQ ID NO:5所示氨基酸序列C端偶联有王树脂或2-CTC树脂以及在Trp侧链上和Arg侧链上偶联有保护基的多肽片段5；

步骤2、将多肽片段5的N端和多肽片段4的C端偶联，偶联后脱除多肽片段4的N端保护基，得到肽树脂Ⅰ；

步骤3、将多肽片段3的C端和肽树脂Ⅰ的N端偶联，偶联后脱除多肽片段3的N端保护基，得到肽树脂Ⅱ；

步骤4、将多肽片段2的C端和肽树脂Ⅱ的N端偶联，偶联后脱除多肽片段2的N端保护基，得到肽树脂Ⅲ；

步骤5、将多肽片段1的C端和肽树脂Ⅲ的N端偶联，得到利拉鲁肽树脂；

步骤6、利拉鲁肽树脂裂解脱除C端树脂和所有保护基得到利拉鲁肽粗品，粗品纯化后即得利拉鲁肽。

其中，步骤1所述固相载体为树脂固相载体，更优选为2-CTC树脂。