[发明专利]一种合成利拉鲁肽的方法

权利要求书

1.一种合成利拉鲁肽的方法，其特征在于，包括以下步骤：

步骤1、固相合成在SEQ ID NO:1所示氨基酸序列N端、His侧链上以及Glu侧链上偶联有保护基的多肽片段1；

固相合成在SEQ ID NO:2所示氨基酸序列N端、Thr侧链上、Ser侧链上以及Asp侧链上偶联有保护基的多肽片段2；

固相合成在SEQ ID NO:3所示氨基酸序列N端、Ser侧链上、Tyr侧链上以及Glu侧链上偶联有保护基的多肽片段3；

固相合成在SEQ ID NO:4所示氨基酸序列N端、Gln侧链上、Glu侧链上偶联有保护基以及在Lys侧链上偶联有N^α-Palmitoyl-L-γ-glutamyl-OtBu的多肽片段4；

固相合成在SEQ ID NO:5所示氨基酸序列C端偶联有王树脂或2-CTC树脂以及在Trp侧链上和Arg侧链上偶联有保护基的多肽片段5；

步骤2、将多肽片段5的N端和多肽片段4的C端偶联，偶联后脱除多肽片段4的N端保护基，得到肽树脂Ⅰ；

步骤3、将多肽片段3的C端和肽树脂Ⅰ的N端偶联，偶联后脱除多肽片段3的N端保护基，得到肽树脂Ⅱ；

步骤4、将多肽片段2的C端和肽树脂Ⅱ的N端偶联，偶联后脱除多肽片段2的N端保护基，得到肽树脂Ⅲ；

步骤5、将多肽片段1的C端和肽树脂Ⅲ的N端偶联，得到利拉鲁肽树脂；

步骤6、利拉鲁肽树脂裂解脱除C端树脂和所有保护基得到利拉鲁肽粗品，粗品纯化后即得利拉鲁肽。

2.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述固相合成多肽片段1具体为：

将N端偶联有Fmoc保护基的甘氨酸（Fmoc-Gly-OH）溶解并活化，与固相载体偶联后脱Fmoc保护基得到H-Gly-固相载体，然后按照SEQ ID NO:1所示氨基酸序列C端到N端的顺序，依次逐个将N端偶联有Fmoc保护基以及侧链偶联有OtBu保护基的谷氨酸（Fmoc-Glu（OtBu）-OH）、N端偶联有Fmoc保护基的丙氨酸（Fmoc-Ala-OH）、N端偶联有Boc保护基以及侧链偶联有Trt保护基的组氨酸（Fmoc-His（Trt）-OH）进行延伸偶联，偶联后裂解脱除固相载体得到多肽片段1（Boc-His（Trt）-Ala-Glu(OtBu)-Gly-OH）。

3.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述固相合成多肽片段2具体为：

将N端偶联有Fmoc保护基的甘氨酸（Fmoc-Val-OH）溶解并活化，与固相载体偶联后脱Fmoc保护基得到H-Val-固相载体，然后按照SEQ ID NO:2所示氨基酸序列C端到N端的顺序，依次逐个将N端偶联有Fmoc保护基以及侧链偶联有OtBu保护基的天冬氨酸（Fmoc-Asp（OtBu）-OH）、N端偶联有Fmoc保护基以及侧链偶联有tBu保护基的丝氨酸（Fmoc-Ser（tBu）-OH）、N端偶联有Fmoc保护基以及侧链偶联有tBu保护基的苏氨酸（Fmoc-Thr（tBu）-OH）、N端偶联有Fmoc保护基的苯丙氨酸（Fmoc-Phe-OH）、N端偶联有Fmoc保护基以及侧链偶联有tBu保护基的苏氨酸（Fmoc-Thr（tBu）-OH）进行延伸偶联，偶联后裂解脱除固相载体得到多肽片段2（Fmoc-Thr(tBu)-Phe-Thr(tBu)-Ser(tBu)-Asp(OtBu)-Val-OH）。

4.根据权利要求1所述方法，其特征在于，步骤1所述固相合成多肽片段3具体为：

将N端偶联有Fmoc保护基的甘氨酸（Fmoc-Gly-OH）溶解并活化，与固相载体偶联后脱Fmoc保护基得到H-Gly-固相载体，然后按照SEQ ID NO:3所示氨基酸序列C端到N端的顺序，依次逐个将N端偶联有Fmoc保护基以及侧链偶联有OtBu保护基的谷氨酸（Fmoc-Glu（OtBu）-OH）、N端偶联有Fmoc保护基的亮氨酸（Fmoc-Leu-OH）、N端偶联有Fmoc保护基以及侧链偶联有tBu保护基的酪氨酸（Fmoc-Tyr（tBu）-OH）、两个N端偶联有Fmoc保护基以及侧链偶联有tBu保护基的丝氨酸（Fmoc-Ser（tBu）-OH）进行延伸偶联，偶联后裂解脱除固相载体得到多肽片段3（Fmoc-Ser(tBu)-Ser(tBu)-Tyr(tBu)-Leu-Glu(OtBu)-Gly-OH）。