[发明专利]双功能共缀物的制备方法

权利要求书

1.如式I所示的化合物及其药学上可接受的盐的制备方法，

其中，当A为苯基时，B为乙酰氧基；当A为叔丁氧基时，B为羟基；

n为2至12的自然数；

X选自C1-6烷烃基、C1-6烯烃基、含有杂原子的C1-6烷烃基、或者X表示单键，即M和酰基直接相连；并且所述的杂原子选自氧原子、硫原子、氮原子。

M环选自芳基、杂芳基；

R选自氢、取代或非取代的C1-6直链或支链烷基、羟基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷氧基、巯基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷硫基、C1-6烷氧C1-6烷基、氨基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷氨基、其中包括单烷氨基和双烷氨基、醛基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷酰基、羧基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷酰氧基、氨基甲酰基、取代或非取代的C1-6直链或支链烷酰胺基、C2-6的烯烃、卤素、硝基、氰基、C1-6直链或支链烷基上的取代基选自：羟基、巯基、氨基、醛基、羧基、氨基甲酰基、卤素、硝基、氰基。

其特征在于，具体步骤如下：

1）液相合成紫杉醇或多西紫杉醇2′-O-烷烃基二酸单酯；

2）固相或液相合成胞壁酰二肽简化物；

3）液相合成紫杉醇或多西紫杉醇与胞壁酰二肽简化物的共缀物。

2.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤1）中液相合成紫杉醇2′-O-烷烃二酸单酯包括如下具体步骤：

（1）首先，将紫杉醇，烷烃基二酸酐和4-N，N-二甲基吡啶溶于吡啶中，室温搅拌4小时，反应完毕；

（2）然后，先后以乙酸乙酯稀释吡啶溶液，以饱和硫酸铜溶液洗涤乙酸乙酯相，以水洗涤乙酸乙酯相；

（3）最后，分离乙酸乙酯相，减压浓缩溶剂，向少量残余液中加入大量水，体系内析出白色固体，过滤，冷冻干燥，得到目标产物。

3.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤1）中液相合成多西紫杉醇2′-O-烷烃二酸单酯包括如下具体步骤：

（1）首先，将多西紫杉醇，烷烃基二酸酐和4-N，N-二甲基吡啶溶于N，N-二甲基甲酰胺中，室温搅拌2小时，反应完毕；

（2）然后，先后以二氯甲烷稀释N，N-二甲基甲酰胺溶液，以2N盐酸水溶液洗涤二氯甲烷相，以水洗涤二氯甲烷相；

（3）最后，分离二氯甲烷相，减压浓缩溶剂，用少量甲醇溶解残余物，再加入大量水，体系内析出白色固体，过滤，冷冻干燥，得到目标产物。

4.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，其特征在于，步骤2）中固相或液相合成胞壁酰二肽简化物包括具体步骤如下：

1）固相合成：

（1）首先，液相合成中间体Fmoc-D-iso-Gln-OH；

（2）然后，利用氨基树脂Rink-AmideAM作为固相载体，通过多肽固相合成策略先后向树脂引入氨基酸Fmoc-L-Lys(Boc)-COOH、Fmoc-D-iso-Gln-COOH、Fmoc-L-Ala-COOH和有机羧酸；缩合反应为常规的酰胺缩合反应，通过每次加入过量的上述三种氨基酸或有机羧酸之一和缩合剂HATU或HBTU或BOP或PyBOP中的任意一种可以使缩合反应完全；反应完成后，经充分洗涤树脂、裂解树脂以及纯化产物粗品等步骤，得到胞壁酰二肽简化物；

2）液相合成：

（1）首先，合成中间体Boc-D-Glu(OBzl)-NH2和Boc-Lys(Z)-NH2；

（2）然后，用活泼酯法先后合成二肽片段Boc-Ala-D-Glu(OBzl)-NH2和三肽片段R-Ala-D-Glu(OBzl)-NH2，用氢溴酸的醋酸溶液或者其他酸性或者碱性条件脱除三肽片段的Bzl保护基，继续用活泼酯法合成四肽R-Ala-D-iso-Gln-Lys(Z)-NH2；

（3）最后，用三氟化硼乙醚、三氟乙酸和乙硫醇混合溶液（体积比9：9：2）脱除Z保护基，得到产物粗品，纯化后得到胞壁酰二肽简化物。

5.根据权利要求4的制备方法，其特征在于，固相合成方法种的氨基酸Fmoc-L-Lys(Boc)-COOH、Fmoc-D-iso-Gln-COOH、Fmoc-L-Ala-COOH可以替换为其它任意天然及非天然氨基酸。

6.根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤3中紫杉醇或多西紫杉醇与胞壁酰二肽简化物的共缀物的液相合成包括具体步骤如下：

1）首先，将紫杉醇或多西紫杉醇2′-O-烷烃二酸单酯与特定摩尔比例(2∶1-1∶2)的HOSu和DIC溶于二甲基亚砜或者N，N-二甲基甲酰胺、或者N-甲基吡咯烷酮等溶液中中，在-20°C-+50°C温度范围内反应1-10小时；

2）然后，将等摩尔比例的胞壁酰二肽简化物加入上述二甲基亚砜、或者N，N-二甲基甲酰胺、或者N-甲基吡咯烷酮等溶液中，用N-甲基吗啉等弱碱性试剂将反应体系的pH值调节至6～8，继续反应1-10小时，反应完全后形成共缀物；

3）最后，向反应液中加入水、甲醇、乙醇、乙醚、石油醚、乙基丁基醚中的任意一种后析出固体，过滤，粗品经制备HPLC法或重结晶法纯化得到目标产物。