[发明专利]一种卷团素C的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于中药提取分离技术领域，涉及一种从粘液卷团叶中分离制备卷团素C的方法。

背景技术

卷团素C来源于番荔枝科植物番荔枝科(Annonaceae)粘液卷团Rollinia mucosa(Jacq.)Vaill.的叶。

粘液卷团叶主要有效成分为乙酰精宁类化合物，以卷团素C含量最高。卷团素C具有细胞毒活性，有显著的选择性细胞毒活性，对A-549、MCF-7、HT-29、A-498、PC-3和PACA-2的细胞株ED₅₀(μg/ml)依次为1.3、1.1、0.063、1.4、0.29和0.11。目前，番荔枝科植物次生代谢物乙酰精宁类（annonanceous acetogenins，AAGs）化合物被视为新的抗肿瘤药物的潜在资源，AAGs能抑制人卵巢瘤IA9细胞复制、诱导癌细胞凋亡，是强效的复合物I抑制剂，抗肿瘤药物的候选药物。

目前，尚未见高含量卷团素C的制备方法相关专利报道。

发明内容

本发明的目的是提供一种卷团素C的制备方法。

本发明的目的是通过以下技术方案实现的：

（1）取粘液卷团叶，经粉碎处理，加8-15倍50-80%乙醇溶液在30-45℃的温度下进行连续逆流超声提取30-80min，过滤，得到提取液；

（2）提取液通过截留分子量为1000-3000的超滤膜超滤和截留分子量为100-500的纳滤膜浓缩，操作压力为0.5-2.5MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；

（3）采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，其两相溶剂系统为石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，收集卷团素C组分；

（4）将卷团素C组分进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C。

所述步骤（1）中超声频率为40-65KHz。

所述步骤（3）中石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水溶剂系统的体积比为5-7:5-7:4-7:3-5。

本方法的积极效果是：

（1）本方法采用连续逆流超声提取，实现了超声提取和连续逆流提取同时进行，提取效果好，同时实现连续作业；

（2）本方法采用膜分离技术，能有效去除多种杂质，且不会破坏有效成分的生物活性，而且与连续逆流超声提取相结合，实现提取浓缩连续作业；

（3）本方法采用高速逆流色谱法，收率高、制备量大、制备周期短，解决了柱层析效率低而且污染严重的技术缺陷；

（4）本方法工艺步骤操作较简单，易操作，所得产品纯度高。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

实施例1：

取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取1kg，加8倍80%乙醇溶液在45℃的温度下进行连续逆流超声提取30min，超声频率为60KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为3000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为0.8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比5:5:6:3石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量95.7%。

实施例2：

取粘液卷团叶，经粉碎处理，称取1kg，加12倍50%乙醇溶液在30℃的温度下进行连续逆流超声提取80min，超声频率为45KHz，过滤，得到提取液，提取液通过截留分子量为1000的超滤膜超滤和截留分子量为500的纳滤膜浓缩，操作压力为1.8MPa，膜浓缩液减压浓缩干燥，得粗提物；采用高速逆流色谱法分离纯化粗提物中的卷团素C，以体积比7:7:7:4石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为两相溶剂系统，上相注满高速逆流色谱柱为固定相，转动主机，泵入下相做流动相，流动相溶解粗提物由进样阀进样，紫外检测器在线监测，检测波长为222nm，收集卷团素C组分，进行真空浓缩，析出结晶，滤出结晶，加入90%甲醇回流溶解，放置重结晶，过滤、洗涤干燥即得卷团素C，含量96.4%。