[发明专利]一种检测微痕量克百威的方法

权利要求书

1.一种检测微痕量克百威的方法，其特征在于：具体步骤如下,

步骤1：将面粉和蒸馏水以1:5的重量比进行混合得到面糊，对该面糊进行搅拌使面粉与水均匀混合，然后将所述面糊在4000r/min的离心速度之下离心10min，收集上清液，即得粗酶；

步骤2：取1mL步骤1中的粗酶，将该粗酶加入到27%PEG1000/13%NaH₂PO₄体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，取出PEG相，将取出的PEG相加入到27%PEG1000/13%NaH₂PO₄/6%(NH₄)₂SO₄体系中，搅拌混合均匀，静置分相后，对由磷酸二氢钠与硫酸铵组成的无机盐相进行透析、浓缩和冷冻干燥，得到纯化后的植物酯酶粉末，然后再将该植物酯酶粉末用蒸馏水溶解得到植物酯酶酶液；

步骤3：配制浓度为70～165μmol/L四苯基锌卟啉溶液，其中四苯基锌卟啉的粉末为溶质， N,N-二甲基甲酰胺为溶剂；

步骤4：将步骤2制备的植物酯酶酶液、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液及pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲液均匀混合得到四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲液的体积比为1：0.5～2：48.5～47；

步骤5：使用紫外分光光度计检测步骤4中制得的四苯基锌卟啉～植物酯酶复合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线；

步骤6：将步骤2制备的植物酯酶酶液、步骤3制备的四苯基锌卟啉溶液和pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲液均匀混合，再加入待测样品N,N～二甲基甲酰胺清洗液，搅拌均匀混合后得到样品混合溶液，其中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液，pH值为6.5～7.25的磷酸盐缓冲溶液和待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的体积比为1：0.5～2：42～43.5：5；

步骤7：使用紫外分光光度计检测步骤6中制得样品混合溶液对波长300nm～750nm的光波的吸收光谱曲线；

步骤8：对步骤5测得的吸收光谱曲线与步骤7测得的吸收光谱曲线进行比较，如果两个光谱曲线完全相同，则待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液中不含有克百威或克百威的含量超出了本方法的检测限；如果两个光谱曲线不同，则待检测样品中含有克百威。

2.如权利要求1所述的克百威残留量的检测方法，其特征在于：步骤3中制得四苯基锌卟啉溶液的浓度为70μmol/L；步骤4中加入的磷酸盐缓冲液pH值为6.5，制得的四苯基锌卟啉-植物酯酶复合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉的溶液和pH值为6.5的磷酸盐缓冲液的体积比为1：2：47；步骤6中，制得的样品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液，pH值为6.5的磷酸盐缓冲溶液和待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的体积比为1：2：42：5。

3.如权利要求1所述的克百威残留量的检测方法，其特征在于：步骤3中制得四苯基锌卟啉溶液的浓度为90μmol/L；步骤4中加入的磷酸盐缓冲液pH值为7.0，制得的四苯基锌卟啉-植物酯酶复合溶液中，植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉的溶液和pH值为7.0的磷酸盐缓冲液的体积比为1：1.5：47.5；步骤6中，制得的样品混合溶液中植物酯酶酶液，四苯基锌卟啉溶液，pH值为7.0的磷酸盐缓冲溶液和待测样品的N,N～二甲基甲酰胺清洗液的体积比为1：1.5：42.5：5。

4.如权利要求1所述的克百威残留量的检测方法，其特征在于：所述检测方法适用于大豆、甘蔗、水稻、蔬菜、水果和食品中克百威残留量的检测。