[发明专利]基于DNA分析的羊毛羊绒定量检测方法

说明书

技术领域

本发明属于生物工程领域，具体地说，是关于一种基于DNA分析的羊毛羊绒定量检测方法。

背景技术

羊绒素有“软黄金”之称，价格昂贵，其良好的服用性能使得羊绒产品一直广受欢迎。我国是山羊绒的重要生产国之一，世界上70%的羊绒都出自我国内蒙、新疆、宁夏等地，每年依靠此项出口创汇数额可观。一些不法商贩将羊毛或脱鳞（改性）羊毛，拉伸绵羊毛等极易与山羊绒纤维混淆的纤维混为山羊绒，牟取暴利，极大地败坏了我国的声誉。

2004-2006年，经多次协商，英、美、法、澳大利亚及我国的专家一致同意用鳞片厚度来鉴别羊毛羊绒。羊绒的鳞片厚度（鳞片细胞本身的厚度）为0.42μm以下，羊毛鳞片均在0.54μm以上。近年来，一方面是超细绵羊品种的出现，这些羊毛的鳞片厚度均在0.50μm以下；另一方面，片面追求高产，辽宁盖县的高产绒山羊得到了大力推广，羊绒普遍增粗，鳞片厚度增大。依靠鳞片厚度的鉴别方法已经无法正确鉴别羊毛羊绒。

羊毛羊绒的精确检测一直是纺织品检测领域的难题。一般来说化学合成纤维的鉴别相对容易，而物理、化学性质相近的天然纤维的鉴别就比较困难，加之天然动物纤维常常要进行防缩处理及染色等工艺，增加了检测的难度。目前常规使用的检测方法为物理法，主要包括光学显微镜法和扫描电镜法（SEM）。国内外不同标准不约而同地将显微镜法置于最重要和最广泛的应用地位。显微镜检测存在一些问题：费时，费力，且依赖检测人员的经验，因而具有不可避免的主观性。而扫描电镜也存在着成本高，制样麻烦，检测时间长等缺陷。图1是扫描电镜下放大600倍的山羊绒和绵羊毛纤维。

因此，建立新的方法，准确客观地鉴别细羊毛与山羊绒纤维，对于公平贸易和维护我国产绒大国的良好声誉，显得尤为迫切。

随着生物技术和生命科学的飞速发展，DNA检测技术以其客观性和精准性在食品、动植物检疫、医疗诊断、司法鉴定及环境监测等领域得到了广泛的应用。近年，有很多学者开展了基于DNA技术的纤维物种鉴别研究，对纺织品质量检测现代化技术的发展具有重要的推动作用。

发明内容

本发明的的第一个目的在于提供一种基于DNA分析的羊毛羊绒定量检测方法。

本发明的的第二个目的在于提供一种山羊源性纤维成分的检测试剂盒。

本发明的的第三个目的在于提供所述山羊源性纤维成分的检测试剂盒的应用。

本发明的的第四个目的在于提供一种绵羊源性纤维成分的检测试剂盒。

本发明的的第五个目的在于提供所述山羊源性纤维成分的检测试剂盒的应用。

本发明的的第六个目的在于提供一种山羊源性纤维成分的特异性引物和特异性探针。

本发明的的第七个目的在于提供一种绵羊源性纤维成分的特异性引物和特异性探针。

本发明所需要解决的技术问题，可以通过以下技术方案来实现：

作为本发明的第一方面，一种基于DNA分析的羊毛羊绒定量检测方法，包括以下步骤：

步骤一、以待测样品的DNA为模板，进行荧光定量PCR扩增；

步骤二、检测扩增产物的荧光信号；

步骤三：计算待测样品中山羊源性纤维成分和绵羊源性纤维成分的含量；

其中，用于PCR扩增的反应体系中含有扩增山羊源性纤维成分特异性引物对和山羊源性纤维成分特异性探针，以及扩增绵羊源性纤维成分特异性引物对和绵羊源性纤维成分特异性探针。

其中，所述扩增山羊源性纤维成分特异性引物对的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

其中，所述山羊源性纤维成分特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

其中，所述扩增绵羊源性纤维成分特异性引物对的序列如SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5所示。

其中，所述绵羊源性纤维成分特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：6所示。

作为本发明的第二方面，一种山羊源性纤维成分的检测试剂盒，含有以下试剂：

（a）扩增山羊源性纤维成分特异性引物对；

（b）山羊源性纤维成分特异性探针。

进一步地，所述试剂盒还包括：

（c）标准参照物。

其中，所述扩增山羊源性纤维成分特异性引物对的序列如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所示。

其中，所述山羊源性纤维成分特异性探针的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。