[发明专利]一种二氢乌桑巴拉山碱的纯化方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种二氢乌桑巴拉山碱的纯化方法，特别是涉及一种应用超临界CO₂萃取和高速逆流色谱提取纯化二氢乌桑巴拉山碱的方法。

背景技术

二氢乌桑巴拉山碱为咔啉生物碱，分子式C₂₉H₃₀N₄，mp.143-145℃），[α]D+109.7°(氯仿)。二氢乌桑巴拉山碱具有抗恶性疟原虫活性，其IC50为0.023μM。二氢乌桑巴拉山碱还具有抗菌活性和细胞毒活性，在浓度为100微克时，其对金黄色葡萄球菌、包皮垢分枝杆菌和枯草杆菌的抑菌区直径（mm）分别为6、19、19。

经文献检索，尚未发现二氢乌桑巴拉山碱的相关提取纯化方法的相关报道。

发明内容

本发明要解决的技术问题是填补该领域的空白，提供一种高纯度二氢乌桑巴拉山碱的纯化方法，该方法产品收率高、含量高。

为了解决上述技术问题，本发明的技术方案如下：

以夹竹桃科植物马克白坚木的树皮为原料，粉碎，加入碱性醇浸润3-8小时，加入萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，收集萃取物，用3%盐酸水溶液溶解，过滤，氨化沉淀，沉淀物以石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱仪分离，减压干燥即得高含量二氢乌桑巴拉山碱。

所述的碱性醇为70-99%乙醇，氨水调节pH9-11。

所述超临界CO₂萃取条件为：萃取温度为40-65℃，萃取压力为25-40MPa，CO₂流量为20-60L/h，萃取时间为1-3h。

所述的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-水比例为5：（3-7）：（5-12）：3。

本发明的积极效果在于：

1)方法采用超临界CO₂萃取，是一种环保无污染的方法，提取时间短，效率高，能耗较低，CO₂重复利用；

2)方法采用高速逆流色谱分离，是一种液液萃取方法，没有产品损失，是一种高效分离方法，制备周期短，试剂可以重复利用，制备量大。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式

实施例1：

取1kg马克白坚木的树皮，粉碎，加入70%乙醇（氨水调节pH9）浸润3小时，加入萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，调节萃取温度为40℃，萃取压力为40MPa，CO₂流量为60L/h，萃取3h，在分离釜中收集萃取物，用3%盐酸水溶液溶解，过滤，氨化收集沉淀物，取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按（5：7：12：3）比例混合，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节900r/min，取乙酸乙酯溶解沉淀物注入色谱仪，收集二氢乌桑巴拉山碱流分，减压干燥得白色二氢乌桑巴拉山碱68mg，高相液相检测，含量98.3%。

实施例2：

取1kg马克白坚木的树皮，粉碎，加入99%乙醇（氨水调节pH11）浸润8小时，加入萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，调节萃取温度为65℃，萃取压力为25MPa，CO₂流量为20L/h，萃取1h，在分离釜中收集萃取物，用3%盐酸水溶液溶解，过滤，氨化收集沉淀物，取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按（5：3：5：3）比例混合，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节950r/min，取乙酸乙酯溶解沉淀物注入色谱仪，收集二氢乌桑巴拉山碱流分，减压干燥得白色二氢乌桑巴拉山碱39mg，高相液相检测，含量98.7%。

实施例3：

取1kg马克白坚木的树皮，粉碎，加入80%乙醇（氨水调节pH10）浸润5小时，加入萃取釜中，采用超临界CO₂萃取，调节萃取温度为55℃，萃取压力为38MPa，CO₂流量为40L/h，萃取2h，在分离釜中收集萃取物，用3%盐酸水溶液溶解，过滤，氨化收集沉淀物，取石油醚、乙酸乙酯、甲醇、水，按（5：6：7：3）比例混合，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850r/min，取乙酸乙酯溶解沉淀物注入色谱仪，收集二氢乌桑巴拉山碱流分，减压干燥得白色二氢乌桑巴拉山碱85mg，高相液相检测，含量98.1%。

实施例4：