[发明专利]一种新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列及其应用

说明书

技术领域

本发明属于生物制品技术领域，具体涉及一种新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列及其应用。

背景技术

新布尼亚病毒（Novel Bunyavirus，SFTS Bunyavirus），是发热伴血小板减少综合症（Fever with Throbocytopenia Associated Syndrome， SFTS）的病原，为布尼亚病毒科白蛉热病毒属的一种新型病毒，于2009年在中国首先发现。患者出现以发热、血小板减少、多器官功能紊乱等为特征的严重急性传染病。到目前为止，全国已有河南、江苏、湖北和辽宁等16个省发现1000多病例，造成50余人死亡。国家疾控中心已经成功的分离到该病病毒，并对其进行了病原学和临床医学等研究。目前该病毒序列已经阐明，病毒蛋白已经鉴定，nucleocapsid protein （NP）蛋白约占病毒总蛋白90%，为鉴定病原最敏感的病毒抗原。但是研究发现从病毒直接分离NP蛋白成本高，且有潜在风险。使用源于病毒的编码序列直接构建大肠杆菌重组蛋白表达系统表达效率低下，难以低成本获得高纯度重组NP蛋白。

发明内容

本发明的目的在于提供一种依据E Coli.密码子偏好作密码子优化设计的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列及其应用。

本发明提出的依据E Coli.密码子偏好作密码子优化设计的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列，为SEQ ID No.1所示。

本发明提出的所述新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列的应用，是将上述新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列克隆到pQE表达质粒（Qiagen，德国），转化E Coli. M15菌株（Qiagen，德国），常规培养，诱导表达，Hitrap（Amersham Pharmacia，美国）纯化，即可以得到高产量、高纯度新布亚病毒重组NP蛋白。 

本发明涉及一种依据E Coli.密码子偏好作密码子优化设计的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列以及应用，具体就是制备重组新布尼亚病毒NP蛋白的方法，其步骤为 ：

1) 依据E Coli.密码子偏好作密码子优化设计以及合成的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列；

2) 密码子优化设计的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列克隆到大肠杆菌表达质粒pQE30，制备pQE30-rNP重组质粒，其DNA为SEQ ID No.2所示；编码的重组NP蛋白氨基酸序列为SEQ ID No.3所示；

3) pQE30-rNP重组质粒转化 E Coli. M15菌；

4)常规培养诱导重组蛋白表达；以及

5)使用Hitrap纯化重组新布尼亚病毒NP蛋白。

本发明的优点在于使用依据E Coli.密码子偏好作密码子优化设计的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列来制备表达质粒，进一步进行诱导表达纯化来制备重组新布尼亚病毒NP蛋白。与传统病毒源性蛋白制备比较，后续纯化制备工艺简单，有更大的安全性；与使用病毒源性编码序列比较，在细菌重组蛋白表达水平高，纯化效率高。密码子优化设计的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列生产重组蛋白成本较低，更容易工业化生产。

附图说明

图1： 合成密码子优化NP蛋白编码序列测序图。

图2：pQE30-rNP重组质粒测序图。其中，划线部分为pQE30质粒骨架序列，其他部分为密码子优化的NP蛋白编码序列；开放读框为796到23，其中796-760位pQE30骨架编码，其余部分插入的合成密码子优化NP蛋白编码序列。

图3：使用依据E Coli.密码子偏好作密码子优化设计的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列表达纯化新布尼亚病毒NP蛋白的SDS-PAGE电泳图。

具体实施方式

以下结合具体实施例，对本发明做进一步说明。本实施例仅仅用于对本发明的说明，不构成对本发明的限制。

实施例1：依据E Coli.密码子偏好作密码子优化设计的新布尼亚病毒NP蛋白的编码序列制备

依据Genbank公布的新布尼亚病毒NP蛋白序列（Genbank登录号：ADZ04472），按照通用遗传密码表和大肠杆菌密码子偏好合成新布尼亚病毒NP蛋白编码序列，其DNA如SEQ ID No.1所示，（图1）。