[发明专利]一种脐带间充质干细胞生物学效力的检测方法

说明书

技术领域

本发明涉及干细胞检测技术，具体地说，涉及一种脐带间充质干细胞生物学效力的检测方法。 

背景技术

脐带间充质干细胞(umbilical cord-mesenchymal stem cells，UC-MSCs)是从脐带组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。脐带是怀孕期间连接母体与胎儿之间的组织，由两条动脉、一条静脉和粘液结缔组织(Wharton’s Jelly)构成。脐带胶、脐带血管壁和血管周围均富含基质间充质干细胞(mesenchymal stem cells，MSCs)和MSCs样细胞(包括基质细胞、血管周细胞等)。自2003年Mitchell等[1]首次自脐带中成功地分离出基质细胞并证实其神经分化潜能后，对脐带组织来源MSCs的研究引起了广泛关注。 

脐带来自于胎儿生产后的废弃物，从脐带中获取MSCs，资源丰富、质量高、较纯净；比从成体组织中获取MSCs细胞在供者来源、细胞数量及增殖潜能、病毒感染率方面都有明显优势。另外UC-MSCs具有高度的分化潜能，良好的免疫调节能力，同时具有低免疫原性，异体移植时可避免排斥反应，使其具有重要的研究和应用前景，特别在治疗免疫相关疾病方面均具有重要的临床应用价值。 

然而，由于细胞治疗本身的特点，间充质干细胞用于临床治疗还具有某些方面的限制因素。其中最典型的方面是缺乏有效而快捷的具有针对性的生物学效力检测手段。目前多数临床前或临床使用的间充质干细胞产品都是依据2006年国际细胞治疗协会提出的三条定义间充质干细胞标准[2]，而缺乏针对某一类疾病的可以定义细胞质量或初步判断细胞治疗效果的方法。 

为克服以上问题的不足，我们对UC-MSCs分泌的一种糖蛋白 -galectin-3(半乳糖凝聚素-3)进行了系统研究，该蛋白是galectins(半乳糖凝聚素)家族的一员，分子量为26kD，大量研究表明该蛋白可有效抑制T淋巴细胞的增殖，促进T淋巴细胞的凋亡[3-7]。 

我们在研究中发现UC-MSCs在核酸水平和蛋白水平均有较高剂量的galectin-3表达，而该蛋白在MSC的表达又分为分泌型的和膜表达型。我们通过RNA干扰试验和Transwell小室共培养试验发现分泌型的galectin-3在脐带间充质干细胞免疫调节方面发挥主要作用，我们同时检测了该蛋白在连续数批UC-MSC上清中的表达，由此提出了一种检测MSC免疫抑制效力的新方法。 

发明内容

本发明的目的在于克服现有间充质干细胞生物学效力检测手段的不足，建立一套有效检测UC-MSC免疫抑制能力的新方法。 

本发明提供了一种脐带间充质干细胞生物学效力的检测方法，其特征在于通过检测脐带间充质干细胞培养上清液中galectin-3的含量来判断其免疫抑制效力。 

在一个特定的实施方案中，所述脐带间充质干细胞为人脐带间充质干细胞，并且其判断标准为：人脐带间充质干细胞培养上清液中galectin-3的含量以2.62ng/ml为阈值，低于此数值的判定为人脐带间充质干细胞免疫抑制效力不合格。 

优选地，使用ELISA方法检测脐带间充质干细胞培养上清液中galectin-3的含量。 

尽管之前的研究已经发现galectin-3表达与UC-MSC免疫抑制能力之间存在密切关系，但并没有开发出一套成熟的脐带间充质干细胞生物学效力的检测方法。本发明首次发现分泌型的galectin-3在UC-MSC免疫抑制过程中起主要作用，并在此基础上开发出一套有效检测UC-MSC免疫抑制能力的方法。本发明的方法以脐带间充质干细胞培养上清液中的分泌型galectin-3蛋白质为检测对象，相比膜表达型galectin-3蛋白质的检测，针对 性强，定量准确；并且由于不需要消化细胞，可适用于大规模连续脐带间充质干细胞培养时免疫抑制效力的检测。本发明的方法检测样本处理简便，并可使用仪器进行自动或半自动检测。 

附图说明

图1A.PCR结果分析hUC-MSC mRNA水平表达galecitn-3，其中1、3、5分别是三批细胞表达galectin-3的条带，2、4、6为相应细胞的β-actin。 

图1B.real-time qPCR结果分析3批hUC-MSC于P2～P5不同代次mRNA水平表达galecitn-3。以β-actin作为内参，对galectin-3的Cp值进行2^-ΔCt分析。 

图2.Westernblot结果分析hUC-MSC上清液和RIPA裂解液中galecitn-3的表达。