[发明专利]丝胶蛋白替代血清的细胞培养基

说明书

技术领域

本发明属于细胞培养基领域，特别涉及一种丝胶蛋白替代血清的细胞培养基。

背景技术

牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必需的营养成份，具有极为重要的功能。血清提供能促使细胞指数生长的激素、基础培养基中没有或含量微小的营养物，以及低分子营养物。胎牛血清是心脏穿刺取血，新生牛(10～14天)和小牛(10个月内)血清是静脉取血。血清采集条件必须符合工业生产的标准：低温下采集、一次分离、分离后立即混合冻存。牛血清在制备的时候首先需要热灭活，在56℃水浴中严格控温30分钟除去对于细胞生长有害的物质；其次血清通过层析的方法去除IgG，再次除去葡萄糖，然后射线灭菌、多次过滤灭菌。整个流程极其复杂，造价高昂，而且血清中可能带有朊病毒，血清的批次也缺少稳定性。

丝胶(sericin)是构成蚕丝纤维外层组织的蛋白质。丝胶对包裹在其内部的丝素起着保护和粘接的作用。丝胶具有水溶性，易溶于热水、酸、碱溶液中。组成丝胶的多数氨基酸含有羟基、羧基、氨基等极性较强的侧基，总量占整体的三分之二，其中丝氨酸和天冬氨酸就分别占33％和17％。

鳞翅目蚕蛾科的家蚕Bombyx mori成茧的丝和大蚕蛾科Saturniidae某些属的野生大蚕蛾成的茧可以用来制备丝胶。除家蚕外，本发明涉及的可以制备丝胶的资源主要有天蚕(Antheraea yamamai；giant silkworm；Japanese oak silkmoth)；中国柞蚕(Antheraea pernyi；tussah；Chinese oak silkmoth)，琥珀蚕(Antheraea assama；muga silkworm)；印度柞蚕(Antheraea proylei)；山蚕(Antheraea roylei)；塔色蚕(Antheraea mylitta；Tasar silkworm)；蓖麻蚕(Samia Cynthia；eri-silkworm)，柳蚕(Ctias selene)，乌桕大蚕蛾(Attacus atlas)，黄目天蚕属(Caligula)，透目天蚕属(Rhodinia)等一些吐丝能力较强的绢丝昆虫。

发明内容

因此，本发明要解决的技术问题就是针对动物细胞培养用血清价格昂贵、又易携带病毒、批次稳定性差的不足，提供一种可以代替血清的动物细胞培养添加剂及含有该添加剂的细胞培养基。

经过广泛的研究和反复的试验，本发明人发现丝胶蛋白用于细胞培养基中能够促进细胞生长，丝胶蛋白替代或者部分代替细胞培养基中的血清后，细胞也能正常生长或者生长的更旺盛，从而完成了本发明。

本发明的技术方案如下：一种细胞培养基，包括基础培养基和营养添加剂，其特征在于，所述的营养添加剂是20～2000μg/ml丝胶蛋白。

本发明中，丝胶蛋白在本发明的细胞培养基中的浓度可以是20～2000μg/ml，也可以是10～500μg/ml或者10～200μg/ml。

本发明中，所述的基础培养基是各种常规的用于动物细胞培养的合成培养基，这些培养基加入牛血清后即可用于细胞的培养。这些培养基都是本发明可以采用的基础培养基。所述的基础培养基包括RPMI 1640、DME、MEM、DMEM、或者HAM F12，优选RPMI 1640。

本发明所述的丝胶蛋白包括家蚕丝胶蛋白、柞蚕丝胶蛋白、蓖麻蚕丝胶蛋白、天蚕丝胶蛋白、琥珀蚕丝胶蛋白、柳蚕丝胶蛋白、乌桕大蚕蛾丝胶蛋白中的一种或多种。

本发明中，所述的细胞培养基较佳的还包括牛血清。牛血清的浓度优选0.5％-15％(wt)，优选0.5％-10％(wt)，更优选0.5％-5％(wt)。所述的牛血清包括胎牛血清、新生牛血清或者成牛血清，优选胎牛血清。

本发明的一较佳实例是：一种细胞培养基，由基础培养基、5％-15％(wt)牛血清和10～500μg/ml丝胶蛋白组成。其中，所述的基础培养基如上所述，最优选RPMI 1640。所述的牛血清如上所述，优选胎牛血清。相对于由基础培养基和5％-15％(wt)牛血清组成的细胞培养基来说，该细胞培养基可以促进细胞生长代谢、促进细胞生长。

本发明的另一较佳实例是：一种细胞培养基，由基础培养基、0.5％-10％(wt)牛血清和10～200μg/ml丝胶蛋白组成。其中，所述的基础培养基如上所述，最优选RPMI 1640。所述的牛血清如上所述，优选胎牛血清。相对于由基础培养基和5％-15％(wt)牛血清组成的细胞培养基来说，该培养基可使细胞正常生长。