[发明专利]一种磺酸结合物的分离方法

说明书

技术领域

本发明属于医药技术领域，特别提供了一种磺酸结合物的制备方法。 

背景技术

药物代谢是机体防御外来物质入侵的最主要方式，被认为是机体抵御外来有害物的重要生化屏障。磺酸结合代谢是机体中一类重要的II相结合代谢反应，在内源性小分子(如甾体类、儿茶酚胺类、花生酸类等)和外源性物质(如药物)的生物转化中起着重要的作用(Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol 2004；369：55-68；Toxicol Sci 2006；90：5-22.)。大多数药物经磺酸结合反应后，生成的磺酸化结合物同底物相比具有更高的溶解度，因此更易于排出体外，从而起到降低药效和毒性的作用。但一些化合物在进行磺酸结合后会形成活性中间体，从而与DNA等大分子通过共价键结合而诱导癌症的发生(Chem Biol Interact 1998；109：221-235)。因此，制备药物的磺酸结合物对临床上安全有效用药具有非常重要的意义。 

磺酸结合物的合成方法主要分为两类：化学衍生法和生物转化法。化学磺酸化衍生法最大的优势是反应速率快、适合大规模生产，但其反应条件苛刻(常常需要强酸强碱或高温)，对于部分化学稳定性差的底物，化学衍生往往产生多种副产物。与化学法相比，生物法具有良好的适用性，可普遍应用于不同结构类型底物的制备，但在制备成本上往往高于化学法。因此，对于特定底物磺酸化产物的制备，可依据底物结构及化学属性选择化学法或生物法达到制备目标磺酸结合物的目的。但是，无论是化学法还 是生物法都存在反应终体系成分不单一，目标产物纯度较低等问题。如何实现对目标磺酸结合物单体的快速纯化制备已成为磺酸结合物制备的关键步骤。然而，目前尚缺少快速分离磺酸结合物单体的有效方法，因此有必要开发一种实用、快速、且高选择分离目标磺酸结合物的技术。 

发明内容

本发明的目的是提供一种磺酸结合物的分离方法，该方法不仅操作简单，而且可以快速获得大量的磺酸代谢产物。 

本发明提供了一种磺酸结合物的分离方法，该方法为底物经过化学衍生或生物转化过程，形成底物和其磺酸结合物的混合物，以此混合物为原料，借助复合材料填充的色谱柱，同时利用不同pH值的洗脱剂实现混合物原料的快速分离。 

本发明提供的磺酸结合物的分离方法，所述方法的要求依次是： 

首先进行化学合成或生物转化处理：磺酸化等化学衍生或含有磺酸化转移酶的生物转化体系将底物全部或部分转化为磺酸结合物并获得待分离样品。所用的酶具体为：重组表达的磺酸转移酶(即：SULT)，或为来源于动物组织的含有SULT酶活性的微粒体或含有微粒体的细胞液(S9)，动物组织优选自肝、肾、肠等强代谢能力的组织；所述底物是含有酚(醇)羟基但不含酸性基团的化合物； 

其次进行分离纯化处理：将上述生物转化过程获得的反应样品通过快速色谱柱富集并纯化后获得目标磺酸结合物；所述快速色谱柱所用填料为含有反相硅胶和阴离子交换树脂的混合填料，两种填料的体积比介于0.2-5；所用硅胶键合有苯基，C8和C18中的一种碳链，硅胶粒径介于10-200μm， 所用阴离子离子交换树脂中要求含有伯胺基、仲胺基、叔胺基、季氨基中的一种碱性基团。 

本发明提供的磺酸结合物的分离方法，所述生物转化过程需要3′-磷酸腺苷-5′-磷酸硫酸酯或者其对应的锂盐等在为生物催化过程提供磺酸基团，其加入的摩尔用量为底物摩尔用量的1-100倍；反应在pH值为6-8的缓冲盐溶液里进行，并保持30-50℃的转化温度(优选35-40℃)。 

本发明提供的磺酸结合物的分离方法，所述快速色谱柱的填料中，硅胶键合有不同长度碳链，碳链长度优选C8和C 18，粒度优选40-60μm。阴离子交换树脂为弱碱性或强碱性离子交换树脂，优选含有伯胺基或仲胺基团的离子交换树脂，树脂粒径为0.2-1mm。两种填料的总质量为不低于底物和代谢产物总质量的20倍。 

本发明提供的磺酸结合物的分离方法，所述的分离纯化过程为将混合物原料溶解后置于色谱柱的柱头，然后分别用水、有机溶剂、酸化有机溶剂淋洗。所述的有机溶剂优选为醇。所述有机溶剂为甲醇、乙醇、异丙醇、乙腈、丙酮中的一种或混合溶剂，优选为醇。所述酸化有机溶剂中所使用的酸为低沸点的有机酸，优选为甲酸或乙酸。