[发明专利]一种地沟油鉴定方法及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及基因诊断技术，更具体地，涉及一种地沟油鉴定方法及其应用。

背景技术

地沟油，亦称“餐厨废弃油”、“潲水油”或“泔水油”，是指采用餐厨废弃物提炼产生的非食用油。提炼地沟油的原料主要来源于宾馆、酒楼剩饭、剩菜(俗称泔水)或下水道中的油腻漂浮物；劣质的猪、牛、羊肉、皮和内脏及经高温反复油炸食品使用后的老火油。地沟油中含有黄曲霉素等致癌物质且胆固醇含量过高，食用后可能导致腹痛、消化系统癌症等多种疾病。我国已明令禁止地沟油回流餐饮行业，然而，将地沟油冒充或掺入正常食用植物油中进行非法销售或使用的现象仍然存在。

大部分经提炼加工的地沟油与正常食用植物油在颜色、透明度甚至味道等感官指标上非常接近，难以通过感官直接鉴别地沟油。近年来，对冒充或掺入食用植物油的地沟油的鉴定方法的研究得到广泛开展，已见报道的鉴定方法有水分含量测定法、钠离子及金属离子含量测定法、十二烷基苯磺酸钠含量测定法、电导率、极性物质及介电常数测定法、酸价及过氧化值测定法、脂肪酸成分比例测定法、胆固醇含量测定法等。这些检测方法的检测指标各异，而且这些检测指标的特异性、稳定性及敏感度还无法满足地沟油鉴定的技术要求。总体来讲，现有方法所选择的检测指标，例如，水分、金属离子、十二烷基苯磺酸钠、电导率、极性物质、介电常数、酸价、过氧化值等，并非是地沟油特有的特征属性。仅基于上述靶标物含量的高低，并不足以鉴别地沟油与正常食用植物油，更不足以指示掺入食用植物油的地沟油，检测指标的特异性不高。此外，上述鉴定方法还普遍存在操作复杂、设备昂贵、检测成本高等问题。

发明内容

本发明要解决的技术问题在于，针对现有技术中鉴定方法的检测指标特异性不高、操作复杂、检测成本高等问题，提供一种检测指标特异性高、操作方便、检测成本低且检测灵敏度高的地沟油鉴定方法及其应用。

本发明要解决的技术问题通过以下技术方案得以实现：提供一种地沟油鉴定方法，其中，所述方法包括以下步骤：

S1：对待检油样进行DNA富集提取；

S2：利用聚合酶链式反应扩增步骤S1中富集提取得到的DNA，得到待检油样的扩增DNA片段；

S3：以多个物种特异性看家基因片段为检测指标，判断所述待检油样的扩增DNA片段是否包含多个物种特异性看家基因片段的至少一个；其中，所述多个物种特异性看家基因片段为非油料植物物种特异性看家基因片段或动物特异性看家基因片段。

在上述地沟油鉴定方法中，在所述步骤S1中，采用核酸裂解液对所述待检油样进行DNA富集提取。

在上述地沟油鉴定方法中，所述采用核酸裂解液对所述待检油样进行DNA富集提取包括：按比例将所述核酸裂解液与所述待检油样混合，加热震荡，离心后弃油相，在水相中再次加入等量的所述待检油样，上述操作重复数次；保留最后一次离心后得到的水相，去除蛋白，加入核酸沉淀液，取DNA沉淀，加入核酸溶解液溶解所述DNA沉淀，制得DNA溶解液。

在上述地沟油鉴定方法中，在去除蛋白之前，将所述最后一次离心后得到的水相平均分装成多管；在加入核酸沉淀液之后，将得到的多管混合溶液转入同一沉淀管。

在上述地沟油鉴定方法中，在所述步骤S2中，所述聚合酶链式反应包括PCR和实时荧光PCR。

在上述地沟油鉴定方法中，在所述步骤S3中，所述动物特异性看家基因片段包括哺乳动物特异性看家基因片段、哺乳动物物种特异性看家基因片段和其他动物物种特异性看家基因片段。

在上述地沟油鉴定方法中，所述哺乳动物特异性看家基因片段为所有哺乳动物共有的基因片段；所述哺乳动物物种特异性看家基因片段包括猪物种特异性看家基因片段、牛物种特异性看家基因片段和羊物种特异性看家基因片段；所述其他动物物种特异性看家基因片段包括鸡物种特异性看家基因片段和鱼物种特异性看家基因片段。

在上述地沟油鉴定方法中，在所述步骤S3中，所述非油料植物物种特异性看家基因片段包括小麦物种特异性看家基因、大米物种特异性看家基因、马铃薯物种特异性看家基因、辣椒物种特异性看家基因和番茄物种特异性看家基因。

根据本发明的另一方面，提供权利要求1-8的地沟油鉴定方法在定性鉴定地沟油方面的应用。