[发明专利]禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白亚单位疫苗的制备方法

权利要求书

1.一种可表达禽脑脊髓炎VP1蛋白的基因工程大肠埃希氏菌(Escherichia coli)，其特征在于该工程菌是将含有所禽脑脊髓炎VP1蛋白基因(序列1)连入克隆载体PM-18T，并转入大肠埃希氏菌DH5α；将鉴定正确的阳性质粒pMD18-T-VP1，用ECORI和SalI双酶切后，经1.2％琼脂糖凝胶电泳，回收到VP1基因；回收的VP1基因连入pET-32a，构建成禽脑脊髓炎VP1蛋白基因的表达载体pET-32a-VP1，转化表达型大肠杆菌Rossetta，获得可表达禽脑脊髓炎VP1蛋白的基因工程大肠埃希氏菌(Escherichia coli)pET-32a-VP1/Rossetta株，该菌株已于2011年12月13日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏编号为CGMCC No.5581。

2.一种由权利要求1所制备的禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白亚单位疫苗，其特征在于该亚单位疫苗含有大肠埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC No.5581表达的脑脊髓炎VP1蛋白和常规矿物油佐剂。

3.一种权利要求2的禽脑脊髓炎病毒VP1蛋白亚单位疫苗的制备方法，其特征在于：将大肠埃希氏菌(Escherichia coli)CGMCC No.5581接种于含有氨苄青霉素和氯霉素的LB平板上，37℃培养过夜后挑取菌落，在含有氨苄青霉素和氯霉素的LB培养液和大肠埃希氏菌培养基中培养至菌液OD₆₀₀为0.6～0.8时，加入终浓度为0.02M的乳糖，进行诱导培养5～7h，离心收集菌体；将收集的菌体用生理盐水进行悬浮，置超声波破碎菌体；经硫酸铵提取、透析后禽脑脊髓炎VP1蛋白；再按常规矿物油佐剂灭活疫苗制备方法制备成疫苗。