[发明专利]一种猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体的酶联免疫试剂盒及应用

权利要求书

1.一种猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体的酶联免疫的试剂盒，其特征在于：包括辣根过氧化物酶标记的猪伪狂犬病毒gE蛋白的单克隆抗体、猪伪狂犬病毒gE蛋白单克隆抗体是以猪伪狂犬病毒为免疫原得到的单克隆抗体、猪伪狂犬病毒为伪狂犬病毒鄂A株；

所述的试剂盒还包括酶标板、样品稀释液、阳性对照、阴性对照、洗涤液、显色液A、显色液B、终止液；

所述的酶标板是以猪伪狂犬病毒在包被酶标板时用0.1mol/L，pH9.6的碳酸氢钠溶液作为包被缓冲液；

所述的阳性对照为猪伪狂犬病毒感染的猪阳性对照血清；

所述的阴性对照为未感染过猪伪狂犬病毒的健康猪阴性血清；

所述的洗涤液为含有0.05%体积比Tween-20的PBS缓冲液；

所述的终止液为含0.25%体积比氢氟酸溶液；

所述的显色液A为含有50mg/mL过氧化氢脲的柠檬酸盐缓冲液，显色液B液为含有0.2mg/mL TMB pH5.0的柠檬酸/柠檬酸钠缓冲液； 

所述的样品稀释液液为含2.5mg/mL的明胶的DMEM培养基。

2.根据权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体的酶联免疫的试剂盒，其特征在于：所述的单克隆抗体，其制备过程是采用杂交瘤细胞技术，用纯化的猪伪狂犬病毒鄂A株免疫BALB/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞进行细胞融合，用HAT选择性培养基进行培养后，再用猪伪狂犬病毒鄂A株和伪狂犬病毒gE/ gI基因缺失株进行间接免疫荧光筛选，筛选的阳性细胞株经有限稀释法克隆，再用猪伪狂犬病毒感染的猪阳性对照血清和猪伪狂犬病毒基因缺失疫苗免疫的阴性对照血清进行阻断ELISA筛选，最终筛选出单克隆抗体，分泌此抗体的细胞株命名为2E6。

3.权利要求1所述的一种猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体的酶联免疫的试剂盒在检测猪伪狂犬病毒gE蛋白抗体的酶联免疫中的应用，其步骤是：

1）从试剂盒中取出酶标板，用样品稀释液将待检血清做2倍稀释：60μL样品稀释液和60μL待检血清混合，取100μL混合液加入酶标板中，同时阳性对照和阴性对照各加2孔，每孔100μL；

2）轻轻振匀孔中样品，置37℃温育45分钟；

3）弃去孔中的溶液，加入洗涤液，200μL /孔，静置3分钟倒掉，重复洗板5次，最后一次在吸水纸上拍干；

4）每孔加酶标单抗100μL，置37℃温育20分钟后洗板5次；

5）每孔加显色液A、显色液B各一滴，混匀，室温避光显色10分钟，每孔加终止液一滴，10分钟内用酶标仪测定每孔OD_630nm读值。