[发明专利]一种检测地沟油的方法及试纸与应用

权利要求书

1.一种检测地沟油的方法，其特征在于：是以细菌脂多糖抗体和/或脂溶性蛋白抗体作为抗体进行检测。

2.根据权利要求1所述的所述的检测地沟油的方法，其特征在于包含以下步骤：待检样品与抗体A反应后，加入葡聚糖-抗体B-荧光素混合标记物继续反应，通过检测荧光的装置进行检测，从而确定待检样品中是否含有地沟油；

所述的抗体A为细菌脂多糖单克隆抗体或细菌脂溶性蛋白单克隆抗体中的一种或两种；

所述的抗体B为同样为细菌脂多糖单克隆抗体或细菌脂溶性蛋白单克隆抗体中的一种或两种；

所述的抗体A与所述的抗体B是相同的蛋白或是不同的蛋白。

3.根据权利要求2所述的所述的检测地沟油的方法，其特征在于包含以下步骤：

所述的抗体A为通过名称为杂交瘤细胞株gzcdc-ETX001的单克隆细胞株制备得到，该单克隆细胞株于2011年12月4日保藏位于中国湖北省武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2011111；

所述的抗体B为通过名称为杂交瘤细胞株gzcdc-ETX001的单克隆细胞株制备得到，该单克隆细胞株于2011年12月4日保藏位于中国湖北省武汉市武汉大学的中国典型培养物保藏中心，保藏编号为CCTCC NO：C2011111。

4.根据权利要求2所述的所述的检测地沟油的方法，其特征在于包含以下步骤：所述的葡聚糖-抗体B-荧光素混合标记物通过以下步骤制备得到：

(1)将荧光素分子与以亲水链为骨架的葡聚糖分子反应，得到结合荧光素的葡聚糖分子；

(2)将结合荧光素的葡聚糖分子与抗体B反应，纯化，得到葡聚糖-抗体B-荧光素混合标记物。

5.根据权利要求4所述的所述的检测地沟油的方法，其特征在于包含以下步骤：所述的葡聚糖为分子量20,000～30,000的葡聚糖；

所述的荧光素为异硫氰酸荧光素；

所述的纯化为通过凝胶层析法进行分离纯化。

6.根据权利要求4所述的所述的检测地沟油的方法，其特征在于包含以下步骤：所述的葡聚糖-抗体B-荧光素混合标记物通过以下步骤制备得到：

(1)结合荧光素的葡聚糖分子的制备：用有机溶剂溶解荧光素，在磁力搅拌条件下，滴加在含葡聚糖的醋酸溶液中，避光反应，使得荧光素上的碳原子与葡聚糖上的二乙烯砜反应以便进行标记偶联；反应结束后，将pH值调至8.8～9.2，离心，取沉淀，得到结合荧光素的葡聚糖分子；其中，荧光素和葡聚糖按质量比1∶8～10进行配比；

(2)葡聚糖-抗体B-荧光素混合标记物初产物的制备：洗涤步骤(1)得到的沉淀，再用醋酸溶液溶解沉淀，接着将pH值调节为4.8～5.2；在磁力搅拌条件下，滴加入抗体B溶液，反应，得到葡聚糖、抗体B和荧光素混合标记物初产物；抗体B的用量按1mg荧光素加入10mg免疫球蛋白计算；

(3)葡聚糖-抗体B-荧光素混合标记物的制备：使用葡聚糖凝胶装柱，用pH值6.8～7.2、0.002～0.01M的磷酸缓冲液平衡；将步骤(2)得到的葡聚糖、抗体B和荧光素混合标记物初产物上样，再用pH值6.8～7.2、0.002～0.01M的磷酸缓冲液洗脱，当黄绿色荧光出现在洗脱液时，收集全部黄绿色荧光溶液；将黄绿色荧光溶液透析，得到葡聚糖-抗体B-荧光素混合标记物。