本发明属于病毒快速检验领域,具体公开了一种特异性结合人类免疫缺陷病毒P24蛋白的荧光素标记多肽、试剂盒及其应用。所述荧光素标记多肽的多肽序列如SEQ ID NO:2=AQSYNYPA或者SEQ ID NO:3=VSGISAM所示;所述试剂盒包括荧光显色试剂和背底消除液,本发明所述的试剂盒中试剂种类数量少,操作简便,采用多肽代替抗体进行产品设计;分子较小穿透力强,不需对细胞进行通透处理即可进入细胞;故不需要进行细胞固定、通透、孵育、洗脱等冗长的操作时间,具有检测时间段的优势,同时操作和结果判断直观,对检验人员要求较低。