[发明专利]一种小核酸的检测方法及其应用

权利要求书

1.一种双链小核酸的检测方法，其特征在于，包括设计与小核酸的一条链互补的封闭核酸和与小核酸另一条链3’端互补的反转录茎环引物以及用于定量PCR的正向引物和反向引物，制备小核酸待检测样品，通过变性、封闭、反转录和定量PCR的方法来检测小核酸。

2.如权利要求1所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的变性的具体步骤为：将小核酸高温加热使双链解开成单链。

3.如权利要求1所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的封闭的具体步骤为：使用几条封闭核酸竞争性杂交小核酸其中一条链。

4.如权利要求1所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的反转录的具体步骤为：用针对小核酸另一条链的反转录茎环引物反转录合成cDNA。

5.如权利要求1所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的定量PCR的方法的具体步骤为：制备小核酸标准样品，用正向引物和反向引物定量PCR扩增待检测样品和标准样品，分析实验数据绘制标准曲线。

6.如权利要求1所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的小核酸包括siRNA、miRNA模拟物或其它双链结构的短链RNA。

7.如权利要求6所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的小核酸是siRNA。

8.如权利要求1所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的封闭核酸的设计方法为：从小核酸一条链的3’端第一个碱基开始依次选取连续或不连续的核苷酸片段，其长度为5~7nt。

9.如权利要求1所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的反转录茎环引物的3’端有6～8个碱基与小核酸一条链的3’端序列互补。

10.如权利要求1所述的双链小核酸的检测方法，其特征在于，所述的小核酸待检测样品来自含小核酸的血液样品、含小核酸的组织匀浆液、总RNA样品或小核酸混合物。