[发明专利]人可溶性CD80蛋白、其编码基因和制备方法

说明书

技术领域

本发明属于基因工程领域。涉及人可溶性CD80剪切变体1(s1CD80)的基因和蛋白，其基因为人CD80的可溶性基因转录产物，编码的蛋白质为人可溶性CD80蛋白。

背景技术

免疫失衡是许多疾病的基础，免疫调节是其关键，共刺激分子是最重要的调节者⁽¹⁾。共刺激分子可根据分子结构分为二类：免疫球蛋白超家族和肿瘤坏死因子超家族。按功能分，可划分为活化和抑制两类。B7家族属于免疫球蛋白超家族，是经典的也是最重要的共刺激分子，CD80是其主要成员。共刺激分子在免疫反应中发挥重要作用，它们决定了免疫反应的方向和强度。

CD80(B7-1)主要表达在抗原递呈细胞(APC)上，与表达在T细胞上的共刺激分子CD28和CD152(杀伤性T淋巴细胞相关抗原，CD152)相互作用，与CD28的作用是启动T细胞活化所必需的，而与CD152的作用可抑制活化。CD80与CD28和CD152的结合活性高于CD86，CD80亦更倾向于与CD152结合，而CD86与CD28、CD152结合无偏向。CD80是可诱导表达蛋白，APC细胞活化诱导CD80表达，在未激活的单核细胞有低水平的CD80表达。

一个基因表达多种mRNA和蛋白质是近年来对基因认识的新发展，在已知的基因中相当数量(＞30％)的基因转录数种RNA，翻译数种蛋白质分子。已有的研究结果发现，同一基因不同的基因表达产物具有不同的功能，甚至是相反的功能。多个共刺激分子CD152，CD28均已发现可溶性基因转录表达的证据。这些可溶性共刺激分子的功能近年已受到关注，研究发现可溶性CD152也有免疫抑制功能，而且其血清水平与多种自身免疫性疾病有关。关于血清中可溶性共刺激分子的信息不多，有报道sCD86在恶性血液病、哮喘、SLE(病人中升高，sCD28在自身免疫性疾病如SLE和Sjogren’s综合症病人升高，sCD152在重症肌无力、甲状腺炎、硬皮病和SLE病人中升高，sCD80或其它可溶性共刺激分子升高可能是免疫系统激活的灵敏指标

CD80基因编码5个区域：信号肽区、IgV-样区、IgC-样区、跨膜区和胞内段。

目前鼠、狗和猪中均已发现有数种CD80异型剪切形式。猪的一种异型剪切同时缺失跨膜区和胞内段，其重组的sCD80-His能与CD28、CD152结合，阻断IL-2的产生和T细胞增殖。研究显示，人可溶性CD80蛋白(sCD80)在恶性血液病、哮喘和系统性红斑狼疮病人血清中都有升高，说明sCD80与疾病的发生具有一定的关系，但是目前对于它的编码序列及其表达产物究竟具有什么样的生理功能还没有明确的答案，因此克隆sCD80的基因具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是提供人可溶性CD80蛋白(s1CD80)的蛋白质序列和其编码基因序列。

本发明的另一个目的是提供人可溶性CD80(s1CD80)基因的制备方法。

本发明提供了分离纯化的人s1CD80蛋白，该蛋白具有如SEQ ID NO 2所示的氨基酸序列。在通常情况下，该蛋白含有7个半胱氨酸，其中6个半胱氨酸组成3个二硫键。

本发明提供了上述人s1CD80蛋白的核苷酸编码序列。由于密码子的简并性，它的核苷酸编码序列与SEQ ID NO.1可以有至少70％的同源度。在本发明的一个实施例中，它的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

本发明提供了人s1CD80的载体，含有该载体的宿主细胞。

本发明还提供了s1CD80基因的制备方法：提取人细胞的总DNA，设计引物，利用聚合酶链反应获得所述DNA分子。也可以按照下述方法制备：提取人细胞的总RNA，反转录为cDNA，然后设计引物，利用聚合酶链反应获得所述DNA分子。在本发明的一个实施例中，所述的人细胞取自斑马鱼。

本发明还提供了用于检测s1CD80基因的核酸分子，该核酸分子含有SEQ ID NO 1中第1-50位核苷酸。

本发明提供了人可溶性CD80蛋白(sCD80)编码基因cDNA序列及其氨基酸序列，将其命名为s1CD80。s1CD80由246个氨基酸组成，其含有7个半胱氨酸，其中6个半胱氨酸组成3个二硫键。与CD80相比s1CD80为CD80跨膜段外显子缺失的转录产物。它包括：具有SEQ ID NO.2氨基酸序列的多肽，或其与具有SEQ ID NO.2氨基酸序列的蛋白具备相同的活性的保守性变异多肽、或其活性片段，或其活性衍生物。