[发明专利]自体干细胞经冠状动脉内移植修复无功能心肌的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种自体干细胞经冠状动脉内移植修复无功能心肌的方法，具体涉及一种自体干细胞经适当间期连续两次通过冠状动脉内移植途径修复无功能心肌的方法。

背景技术：

传统观点认为心肌细胞不能再生，梗死区域最终将会被斑痕组织所代替，并逐步发生左室重构而导致心力衰竭，心脏移植可能是终末期心力衰竭患者惟一可供选择的治疗手段，但其花费巨大、供体的缺乏，因此很难被临床广泛应用。骨髓干细胞是一种具有多向分化潜能的干细胞，可以分化成多种功能组织，具有易于采集、可在体外大量扩增；纯度高、特异性分化能力强；自体干细胞移植，可避免异体移植的免疫排斥反应及胚胎干细胞移植的伦理学问题等优点。通过移植上述功能细胞替代和修复或加强受损的心脏的生物学功能，即干细胞治疗学的干预为心血管疾病的治疗提供了全新的治疗策略。目前，国内外自体干细胞移植修复无功能心肌主要有以下几种途径：1)经冠状动脉注射：能满足氧的供给、创伤少，相对简单、快速，但干细胞滞留率低制约着其临床疗效；2)经外周静脉注射：因干细胞归巢问题的不明确性，其有效性尚存在争议；3)直接室壁内注射：包括经心外膜和经心内膜注射两条途径，虽可准确定位，但其有岛样心肌细胞形成而致心律失常作用的潜在风险；4)经冠状静脉注射：相对安全有效，但需复杂的导管系统伴行技术协作操作；5)经心外膜种植组织工程构建的细胞膜片：定位准确，但创伤大，且其安全性及有效性有待于进一步大规模的临床试验验证。其中经冠状动脉注射法手术创伤小，操作简单、安全、有效，病人乐意接受，是在临床上广为应用的移植途径。但因干细胞注射后滞留率低、间充质干细胞培养失败导致手术不成功等问题，制约着其临床应用。

发明内容：

本发明的目的是提供自体干细胞经冠状动脉内移植修复无功能心肌的方法，它为人类干细胞移植技术开辟新的途径，具有取材容易、创伤小，操作相对简单、快速，且能提高干细胞移植后的滞留和存活，避免了排斥反应和医学伦理问题等优点。

为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案：它的操作步骤为：

1、静息Te^99mSPECT检查发现有灌注缺损区(放射计数低于正常心肌放射计数40％的区域)的患者，于经皮冠状动脉介入治疗前在实验室经双侧髂后上棘6点法抽取骨髓80～100ml；

2、用Ficoll密度梯度离心法获得骨髓单个核细胞悬浮液N×10⁸个/10ml；

3、用流式细胞仪对获得干细胞进行细胞计数及成份鉴定；

4、分离获得的干细胞10ml，细胞活性90％以上；

5、于经皮冠状动脉介入治疗术时对缺血型灌注缺损患者通过大腔导管于梗死相关血管注入干细胞，对非缺血型灌注缺损患者分别于左冠、右冠注入2/3、1/3的干细胞；

6、抽取骨髓后，同时提取骨髓间充质干细胞进行体外培养、扩增，干细胞悬浮液达N×10⁸个/10ml；

7、同样用流式细胞仪对获得干细胞进行细胞计数及成份鉴定；

8、分离获得的干细胞10ml，细胞活性90％以上；

9、于14±1天再次经冠状动脉途径行干细胞移植术(注射方法同上)。

本发明采用于经皮冠状动脉介入治疗时经冠状动脉途径行骨髓单个核细胞移植，14±1天后再次经冠状动脉途径行骨髓间充质干细胞移植。取少量的自体骨髓培养出较多的、能满足临床需要的干细胞数量，同时克服了单次单个核细胞移植滞留率低和单次间充质干细胞移植失败的问题。

本发明具有以下有益效果：

1、自体骨髓、自体血清可避免排斥反应及道德、伦理问题；

2、创伤小、方法简单，操作方便、快速，可重复性强；

3、能提高干细胞移植后的滞留和存活，克服了单次单个核细胞移植滞留率低和单次间充质干细胞移植失败的问题；

4、成本相对低廉、效果好，减轻病人经济负担。

具体实施方式：

本具体实施方式采用以下技术方案：它的操作步骤为：

1、静息Te^99mSPECT检查发现有灌注缺损区(放射计数低于正常心肌放射计数40％的区域)的患者，于经皮冠状动脉介入治疗前在实验室经双侧髂后上棘6点法抽取骨髓90ml；

2、用Ficoll密度梯度离心法获得骨髓单个核细胞悬浮液N×10⁸个/10ml；

3、用流式细胞仪对获得干细胞进行细胞计数及成份鉴定；