[发明专利]静注人免疫球蛋白的制备方法

权利要求书

1.一种静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于所述制备方法包括以下步骤：

从血浆中沉淀组分I+II+III：将低温冰冻血浆融化为液体状态，加入95％的-15℃药用乙醇至最终乙醇浓度至20％，同时调节pH至6.9～7.0，血浆蛋白含量5.0％，调控温度至-5℃，搅拌1小时以上，静置4小时以上后采用离心分离或加压过滤，收集组分沉淀I+II+III；

从组分I+II+III中沉淀组分I+III：在组分I+II+III沉淀加入10倍注射用水重溶解，加入95％的-15℃药用乙醇至最终乙醇浓度至17％，同时调节pH至5.0～5.4，悬液蛋白含量0.8～1.2％，调控温度至-5℃，搅拌1小时以上，静置4小时以上后采用离心分离或加压过滤，收集上清液；

从上清液中沉淀组分II：将上清液调节pH至7.0～7.2，蛋白质含量0.5％，加入95％的-15℃药用乙醇至最终乙醇浓度至25％，调控温度至-7℃，搅拌1小时以上，静置8小时以上后采用离心分离或加压过滤，收集组分II沉淀；

将组分II进行阴离子交换层析；

将层析流出液进行超滤；以及

将超滤后的制品溶液进行除菌过滤。

2.根据权利要求1所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于：所述将组分II进行阴离子交换层析的步骤进一步包括以下步骤：

按组分II沉淀重量5～8倍加入0～2℃注射用水搅拌至完全溶解，静置30分钟将溶解液深层过滤；

过滤液采用0.9％氯化钠溶液调电导率至1.9±0.1ms，用0.5mol/L盐酸调pH值6.30±0.10上平衡后的层析柱，处理至流出液电导率1.9±0.1ms、pH为6.30±0.10后上待处理制品。

3.根据权利要求2所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于：在所述将组分II进行阴离子交换层析的步骤中，所用凝胶的平衡程序如下：

2～3倍凝胶体积注射用水洗涤；

3倍凝胶体积0.5mol/L氢氧化钠溶液处理；

3倍凝胶体积注射用水洗涤；

6倍凝胶体积醋酸盐缓冲液处理；

3倍凝胶体积注射用水洗涤；以及

6～9倍凝胶体积磷酸盐缓冲液。

4.根据权利要求3所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于：在上述凝胶平衡程序中，所述醋酸盐缓冲液配方为6g氢氧化钠加上40ml醋酸加注射用至1L，pH为4.0。

5.根据权利要求2所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于：在所述将组分II进行阴离子交换层析的步骤中所用的凝胶为DEAE-Sepharose。

6.根据权利要求5所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于：所述DEAE-Sepharose凝胶可按如下程序再生：

1～2倍凝胶体积磷酸盐缓冲液处理；

6倍凝胶体积醋酸盐缓冲液处理；

3倍凝胶体积注射用水洗涤；

3倍凝胶体积2mol/L氯化钠溶液洗脱杂质蛋白；

3倍凝胶体积注射用水洗涤；

3倍凝胶体积0.5mol/L氢氧化钠溶液处理；

3倍凝胶体积注射用水洗涤；以及

0.1mol/L氢氧化钠溶液保存或平衡后使用。

7.根据权利要求6所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于：在上述凝胶再生程序中，所述醋酸盐缓冲液的配方为17.5g氯化钠加上6g氢氧化钠加上40ml醋酸加注射用水至1L，pH为4.0。

8.根据权利要求3或6中任一项所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于：所述磷酸盐缓冲液的配方为1.2g氢氧化钠加上1.6ml浓磷酸加注射用水至1L，pH为6.3。

9.根据权利要求2所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于：在所述阴离子交换层析上待处理制品之前，目标免疫球蛋白的pH范围为6.3～7.3。

10.根据权利要求1所述的静注人免疫球蛋白的制备方法，其特征在于所述将层析流出液进行超滤的步骤进一步包括以下步骤：将组分II沉淀用3～5倍注射用水溶解，进行深层过滤，用50K分子量孔径膜包进行透析，去除无机盐离子和乙醇分子，最后浓缩至所需要的蛋白质浓度。