[发明专利]褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗药性分子检测方法

权利要求书

1.一种褐飞虱对苯基吡唑类杀虫剂抗药性分子检测方法，其特征在于如下步骤实现：

a、提取单头褐飞虱2-3龄若虫基因组DNA；

b、PCR反应体系

2.5 μL 10×Buffer，1.25 U Ex-Taq DNA polymerase，2.5 μL单头褐飞虱基因组DNA，终浓度0.2 mmol/L的dNTPs、 1 mmol/L的 MgCl₂，1 μmol/L的内引物、外引物，加双蒸水至反应总体积为25 μL；其中所述的外引物 P：GGCTGATCGTCATCATATCGTGG； Q：GCAACGACGCGAACACCATGACG；内引物 A：TGCGACACCGGCACGAGTGT；B：CGGTGGTGACGCCGAGTGC；

c、PCR反应程序

94 ℃ 3 min；20循环：94℃ 30 s，67－58℃ 30 s，每2个循环降1℃，72 ℃ 1 min；10循环：94℃ 30 s，58℃ 30 s，72 ℃ 1 min；72 ℃ 5 min；

d、扩增产物的电泳检测：

取10 μL PCR扩增产物，在1%g/mL的琼脂糖凝胶上进行电泳，紫外光下检测：存在长度分别约为200 bp 和 150 bp  大小的两条带，说明个体为抗性纯合子；存在长度分别约为200 bp 和80 bp 大小的两条带，说明个体为敏感纯合子；同时存在长度分别约为200 bp 、150 bp和 80 bp大小的三条带，说明个体为杂合子。