[发明专利]布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法无效
| 申请号： | 200910048246.5 | 申请日： | 2009-03-26 |
| 公开（公告）号： | CN101935638A | 公开（公告）日： | 2011-01-05 |
| 发明（设计）人： | 李大伟;姚璎;周虎臣 | 申请（专利权）人： | 上海交通大学 |
| 主分类号： | C12N9/00 | 分类号： | C12N9/00;C12N15/70;C12R1/19 |
| 代理公司： | 上海交达专利事务所 31201 | 代理人： | 王锡麟;王桂忠 |
| 地址： | 200240 *** | 国省代码： | 上海;31 |
| 权利要求书： | 查看更多 | 说明书： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 布氏锥虫亮氨酰 trna 合成 活性 蛋白 制备 方法 | ||
【权利要求书】：
1.一种布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
步骤一，设计特异引物，扩增布氏锥虫全基因组；
步骤二，切胶回收，得到布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶基因；
步骤三，将步骤二得到的基因连接到克隆载体中，构建基因克隆质粒；
步骤四，将克隆质粒亚克隆进表达载体，鉴定，转化大肠杆菌，培养转化的大肠杆菌单克隆，诱导；
步骤五，纯化表达的融合蛋白，得到布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白。
2.根据权利要求1所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法，其特征是，步骤一中，所述特异性引物为，
GGCTGGCATATGTCGACTGTACGAC，TTCGGATCCGCTGCCTTCTTGTC。
3.根据权利要求1所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法，其特征是，步骤四中，所述培养具体为，将转化的大肠杆菌单克隆接种到含氨卞青霉素100μg/ml的LB培养基中，37℃过夜培养，之后将培养的菌液按体积分数为1‰的接种量接种到含氨卞青霉素的LB培养基的培养瓶中，培养至A550OD为0.6-0.8时停止培养，冰上冷却。
4.根据权利要求1所述的布氏锥虫亮氨酰tRNA合成酶活性蛋白的制备方法，其特征是，步骤四中，所述诱导具体为向冷却后的菌液中加IPTG至其终浓度为0.2mM，20℃-25℃过夜。
下载完整专利技术内容需要扣除积分，VIP会员可以免费下载。
该专利技术资料仅供研究查看技术是否侵权等信息，商用须获得专利权人授权。该专利全部权利属于上海交通大学，未经上海交通大学许可，擅自商用是侵权行为。如果您想购买此专利、获得商业授权和技术合作，请联系【客服】
本文链接：http://www.vipzhuanli.com/pat/books/200910048246.5/1.html，转载请声明来源钻瓜专利网。
