[发明专利]一种重组风疹病毒E1蛋白及其应用

说明书

技术领域：

本发明涉及基因工程领域，具体地涉及一种重组风疹病毒E1蛋白及其应用。

背景技术：

风疹病毒(rubella virus，RV)RV是披膜病毒科风疹病毒属的唯一成员，人是其唯一的自然宿主。风疹本身并不严重，后天感染主要表现为急性发热、颌下淋巴结肿大等症状。RV最大的威胁是它的致畸性。孕妇感染RV可对胎儿产生先天性伤害，尤其是妊娠前3个月如感染RV，可通过胎盘感染胎儿，导致流产、死胎，或新生儿的一系列器官畸形，即先天性风疹综合征。建立RV感染的快速、准确检测方法是预防RV感染的关键所在。

目前，风疹病毒感染诊断方法主要有病毒分离法、酶联免疫吸附法(ELISA)、IgG抗体亲和试验、放射免疫技术、核酸杂交法、逆转录PCR，荧光定量PCR，这些方法多基于高特异性的抗原建立。

目前常用的抗原是从病毒中提取抗原，全病毒抗原组成的诊断试剂盒：即风疹病毒感染BHK21或非洲绿猴肾上皮细胞，病变大于80％以上时收集培养物，超速离心后分离病毒，经过反复冻融，超声破碎后制得全病毒抗原。这是目前商业化风疹抗体诊断试剂盒的主要应用抗原，但病毒产量低，所得病毒抗原纯度较低，在检测中，与其它病毒易有交叉，特异性差，准确性较低等。

部分纯化的病毒抗原组成的诊断试剂盒：

将全病毒抗原采用一些或一系列生化方法如分级沉淀、离子交换、分子筛等方法，分离出病毒的某些特定成分，用于血清学诊断。但是，风疹病毒的E1/E2/C抗原成分的分离较为困难，特别是主要抗原成分E1的分离纯化更加困难，基本没有用于商业化诊断试剂盒的研究和开发。

发明内容：

本发明的目的是提供一种用基因工程方法生产，与常用的病毒提取抗原组分相比，可为风疹病毒感染IgM抗体的检测提供更为特异、准确的抗原原料，即重组风疹病毒E1蛋白。

本发明的第二目的是提供一种重组风疹病毒E1蛋白在检测风疹病毒IgM抗体感染的试剂盒中应用。

本发明的第三目的是提供该重组风疹病毒E1蛋白在制备单抗、多抗及蛋白芯片中的应用。

为了实现上述目的，本发明采用的技术方案是：

一种编码风疹病毒E1蛋白的重组DNA，其核苷酸序列如SEQID NO：1所示。同时提供了由该重组DNA序列编码的重组风疹病毒E1蛋白，其氨基酸序列如SEQID NO：2所示。

一种重组风疹病毒E1蛋白的表达载体，它是将如SEQID NO：1所示的重组DNA序列插入到质粒pET-32a上得到的重组质粒pET-32a-E1，其质粒图谱如附图1所示。将表达载体pET-32a-E1导入大肠杆菌中，得到表达重组风疹病毒E1蛋白的工程菌株。

一种检测风疹病毒IgM抗体感染的试剂盒，该试剂盒中含有SEQID NO：2所示的重组风疹病毒E1蛋白。

所述的检测风疹病毒IgM抗体感染的试剂盒，该试剂盒组成如下：

1)反应板：用抗人IgM抗体包被液包被空白板，40ng/100μl/孔，4℃静置16～24小时，洗涤扣干后，加入封闭液，200μl/孔，37℃静置2小时，弃液、干燥后封装；

其中，优选，包被抗人IgM抗体的浓度是40ng/孔；

2)酶结合物：将重组风疹病毒E1蛋白与酶标抗原稀释液混合均匀；

其中，优选，重组风疹病毒E1蛋白的浓度为4mg/mL。

3)浓缩洗液：pH7.4，0.2M PBS，2％吐温-20；

4)底物液A：pH4.5，0.1M柠檬酸-醋酸盐缓冲液，0.05％过氧化氢；

5)底物液B：50％甲醇，0.05％3，3，5，5—四甲基联苯胺(TMB)；

6)终止液：1M硫酸。

检测风疹病毒IgM抗体感染的试剂盒，其组分中的抗原是所述的重组风疹病毒E1蛋白。用于标记重组风疹病毒E1蛋白的标记物选自酶、荧光物质、胶体金中的一种或多种，标记物的制备采用本领域技术人员所熟知的常规方法。所述试剂盒还包括固定抗体的固相，固相可以是本领域技术人员所熟知的常用固相，例如聚苯乙烯、微量滴定板、免疫层析用滤纸等。

优选地，本发明所述的试剂盒采用酶标抗原，其中，包被抗人IgM抗体的浓度是40ng/孔，包被液由0.05mol/L的碳酸盐缓冲组成，pH＝9.6；封闭液由0.01mol/L PBS、0.2％酪蛋白和0.1％硫柳汞钠组成，pH＝8.0；酶标抗原稀释液由0.01mol/L PBS、0.5％酪蛋白和0.1％硫柳汞钠组成，pH＝7.2。