[发明专利]小麦6VS专性RAPD分子标记

说明书

技术领域

本发明属于农业生物工程技术领域，特别涉及小麦6VS专一性RAPD分子标记引物，它作为小麦白粉病抗病育种分子标记的辅助选择。本发明同时也涉及该专一性RAPD分子标记引物的获得方法。

背景技术

异源遗传物质的导入，特别是带有外源目的基因染色体或染色体片段的导入，对作物的改良有十分重要的作用。首先人类对栽培作物的产量、品质、抗逆性等方面的要求越来越高，其次是物种内原有的遗传资源已不能满足物种自身的需要或长期重复使用而造成性状的高度退化，其中小麦对白粉病的抗性就是一个典型的例子。

刘大钧、陈佩度等将簇毛麦的6V染色体导入栽培小麦，育成6V代换系，从6V代换系与农艺亲本的杂交和辐射后代中选育出6VS易位系(齐莉莉，陈佩度，刘大钧。作物学报，1995，21：257-262)。研究表明，6VS上存在一个抗性最强、抗谱最广的Pm21基因(刘金元，陶文静，刘大钧.植物学报，1999，41，(10)：1058-1060；齐莉莉，陈佩度，刘大钧。作物学报，1995，21：257-262；Chen P D，Qi L L，Zhou B，Zhang Z S，Liu D J.Theor Appl Genet，1995，91：11115-1128)。减数分裂时，由于6VS与小麦的6AS不配对，不会发生交换现象，因而Pm21基因一直伴随6AL/6VS易位染色体传递(刘大钧，齐莉莉，陈佩度.遗传学报，1996，23(1)：18-23)，因此寻找6VS分子标记对充分利用Pm21抗源，促进小麦抗白粉病育种工作意义十分重大。

发明内容

本发明的目的在于提供小麦6VS专性分子标记引物OPK08₉₁₀及该标记引物的核苷酸序列。

本发明的另一目的在于提供基于PCR的、小麦6VS专性RAPD分子标记引物OPK08₉₁₀的获得方法。

为了获得小麦6VS上专一性分子标记，本发明是以不具V染色体的普通小麦京411(AABBDD)和硬粒小麦(AABB)为对照，含6V染色体的簇毛麦(VV)、代换系(6A/6V)、易位系(6AL/6VS，6DL/6VS)为材料，用随机扩增多态DNA(RAPD)分析方法，对上述材料进行引物筛选，引物OPK08在上述材料中表现出扩增产物的多态性，获得与6VS相关的RAPD标记OPK08₉₁₀，该特异带存在于所有含6V染色体和6VS的4份材料中，同时还存在于2个6VS的易位系中，因此为6VS专一性分子标记，可以用于小麦白粉病辅助选择育种，该项工作在小麦育种实践及抗病理论上有很高的研究价值，本发明人正是在上述思想的指导下完成了本发明。

本发明的技术方案如下：

一种小麦6VS专性RAPD分子标记，其特征在于所述的分子标记OPK08₉₁₀，引物是用RAPD分子标记技术采用下述方法得到的：用苯酚一氯仿方法提取带有簇毛麦V染色体的代换系(6A/6V)、易位系(6AL/6VS)、易位系(6DL/6VS)、簇毛麦(VV)和不带簇毛麦V染色体的普通栽培小麦京411(AABBDD)和硬粒小麦(AABB)幼苗DNA，采用RAPD分子标记技术，用100个10碱基随机引物，进行与小麦6VS染色体专性特异片段的筛选，发现引物OPK08扩增出一个分子量约为910bp的特异带，存在于所有含6V染色体和6VS的4份材料中，由于它同时存在于两个6VS易位系中，因此OPK08₉₁₀是6VS上的专一性分子标记引物。

本发明所述的RAPD引物序列为：5’GAACACTGGG3’，由上海生工生物工程公司合成。

本发明所述的小麦6VS专性RAPD分子标记，其中所述OPK08₉₁₀的PCR扩增反应体系为：20ng/μl小麦基因组DNA1μl，10×PCR Buffer 2.5μl，25mM MgCl₂ 2.5μl，10mM dNTP 0.5μl，50μM引物0.5μl，5U/μl Taq DNA聚合酶0.25μl，ddH₂O 17.75μl，总体系25μl，反应程序：96℃变性1分钟、35℃退火1分钟、72℃延伸2分钟、4个循环，94℃变性45秒、36℃退火1分钟、72℃延伸90秒、45个循环，72℃补齐10分钟；产物在含有0.5μg/μl EB的1.0％的琼脂糖凝胶电泳分离，紫外灯下观察并照相记录结果。