[发明专利]BMP－2蛋白胶原水溶液及制法和在植骨材料中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种BMP-2蛋白胶原水溶液及制备方法及其在植骨材料中的应用。

背景技术

所说的BMP-2蛋白，是一种对骨生长和修复有明显生物活性的细胞因子——骨形态发生蛋白(Bone Morphogenetic Protein，BMP)，BMP既是多功能形态发生因子，同时又具有突出的诱骨成骨活性，具有巨大的基础研究价值和广阔的临床应用前景。到目前为止，已发现二十种BMP，分别命名为BMP-1，BMP-2，...。

BMP-2可从动物组织内提纯(p-BMP2)，也可用基因工程构建重组细胞表达合成(rhBMP-2)。如在1979年Urist[UAnn Thorac Surg，1990；49(6)：864-5]领导的小组率先从兔脱钙骨中成功地分离纯化了兔的MP-2，于1982年从牛骨中提取出牛骨形态发生蛋白(bBMP)，1987年Urist[Clin Orthop Relat Res.，1987(214)：295-304]建立了一套从人及牛骨中提取BMP的标准步骤。目前，pBMP-2大多从牛、猪、羊、马、兔、鼠等动物的正常骨中提取。天津中津药业股份有限公司生产的金世植骨灵&reg；重组合异种骨(RBX)中的成骨诱导因子就是从牛骨中提取，然后再同牛骨基质复合而成，用于治疗骨折延迟连接、不连接和骨缺损治疗。

利用基因工程方法生产人BMP-2，不仅可保证大量生产，还可避免免疫排斥反应，是极具发展前景和吸引力的方法。自1988年Wozney等以牛骨为来源的BMP-2基因，并在重组大肠杆菌中成功表达后，基因工程大量生产人的BMP-2也就成为可能(Wozney JM，Rosen V，Celeste AJ，etal，Novel regulators of bone formation：molecular clones and activities，science，1988；242(4885)：1525-34)。目前，用于表达BMP-2基因的系统既有真核，也有原核细胞，两种表达系统各有优缺点。

BMP-2蛋白，可以与植骨材料组合，用于骨生长和修复。但是，无论是天然提取的BMP-2蛋白，还是原核基因表达的BMP-2蛋白，在一般缓冲液中不能溶解，只能溶解在高浓度尿素或盐酸胍中。而尿素或盐酸胍不可能在体内使用，这就给该药物的临床使用以及与植骨材料的复合带来极大困难。这也是目前国内外研究BMP-2应用技术的难题之一，极大的限制了BMP-2蛋白在临床上的应用。

发明内容

本发明需要解决的技术问题是公开一种BMP-2蛋白胶原水溶液，以克服现有技术存在的上述缺陷。

本发明需要解决的另一个技术问题是公开所述BMP-2蛋白胶原水溶液的制备方法。

本发明再一个需要解决的技术问题是公开BMP-2蛋白胶原水溶液在植骨材料中的应用。

本发明所说的BMP-2蛋白胶原水溶液中：

BMP-2蛋白的浓度为10mg～20mg/ml，胶原的重量浓度为0.5～5％，优选1～3％，特别优选1％，以及包括使所说的BMP-2蛋白胶原水溶液的pH为3-6的pH调节剂；

所说的BMP-2蛋白，选自从动物组织中提取的天然BMP-2或原核基因表达的BMP-2蛋白；

术语“胶原”指的是从牛或猪的骨组织或筋腱中提取纯化的胶原蛋白，纯度应达到电泳纯度。

所说的pH调节剂选自稀释的冰醋酸或盐酸中的一种，重量浓度为5～30％；

本发明的BMP-2蛋白胶原水溶液的制备方法包括如下步骤：

按照上述的比例，将BMP-2干粉与胶原水溶液搅拌混合，加入pH调节剂调节pH至3-6，获得所说的BMP-2蛋白胶原水溶液；胶原水溶液的重量浓度为0.5～5％，优选1～3％，特别优选1％；

本发明所说的BMP-2蛋白胶原水溶液，可以与植骨材料复合，以组合物的形式，对需要进行植骨治疗。

所说的BMP-2蛋白胶原水溶液与植骨材料复合形成的组合物中，BMP-2蛋白胶原水溶液与植骨材料的比例根据不同的植骨材料而定；

动物试验证明，所说的BMP-2蛋白胶原水溶液无毒性，与所说的植骨材料复合后，可以采用常规的方法对患者进行治疗。

本发明很好的解决了BMP-2的溶解问题，从而解决了与各种材料难以复合难题。胶原是抗原性极低的蛋白，而且具有结合BMP-2，促进BMP-2活性的作用，因此在体内与BMP-2复合使用不仅不会带来药物的副作用，而且有利于BMP-2活性的发挥。

具体实施方式

实施例1