本发明属于基因工程领域,具体涉及用于编码分泌型Mersacidin的基因表达盒及其制备方法。本发明公开了一种用于编码分泌型Mersacidin的基因表达盒,其核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明利用高保真酶扩增Mersacidin基因簇基因mrsK2R2FGEAR1DMT的mrsK2R2FGE、mrsAR1D、和mrsMT,再利用Gibson克隆技术将Mersacidin基因簇3段基因连接,构建成Mersacidin表达盒,该表达盒置于强启动子的下游,将其导入基因工程菌Bacillus subtilisSCK168中实现Mersacidin的高效分泌表达,为饲料添加剂、兽药、食品及医药提供一种廉价的生物抗菌剂和防腐剂