本发明涉及基因工程领域,具体公开了一种基于CRISPR‑Cas系统构建GSTZ1基因敲除细胞系的方法及其应用。本发明基于CRISPR‑Cas系统,成功以人正常肝细胞GSTZ1基因为靶标,获得了高效、特异、精准靶向人正常肝细胞GSTZ1基因的sgRNA分子,如SEQ ID NO:1~SEQ ID NO:2所示,能够靶向人正常肝细胞GSTZ1基因,从而引导Cas蛋白对GSTZ1基因的特异性切割,最终达到敲除GSTZ1基因的目的;并且本发明基于CRISPR/Cas‑sgRNA表达系统敲除GSTZ1基因能够影响肝细胞的增殖。