本申请涉及分子生物学技术领域,具体公开了一种TZAP基因敲除卵巢癌细胞株及其构建方法和应用。所述sgRNA包括sgRNA‑TZAP‑F和sgRNA‑TZAP‑R,所述sgRNA‑TZAP‑F的序列如SEQ ID NO:2所示,所述sgRNA‑TZAP‑R的序列如SEQ ID NO:3所示。本申请基于CRISPR/Cas9技术的TZAP基因敲除方法设计了一段特异的sgRNA识别TZAP基因,最终导致其表达异常。本申请获得的TZAP基因缺失A2780细胞株与正常的A2780细胞株相比能持续促进卵巢癌细胞的增殖,显著提高A2780细胞CFU形成能力及显著促进A2780细胞的迁移能力。
本发明公开了一种基于CRISPR‑Cas9靶向敲除人BNIP3基因的sgRNA、细胞系及应用。所述的sgRNA的靶DNA序列为序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的序列中的至少一种。将sgRNA的DNA双链中的正义链和反义链进行退火形成双链DNA;将双链DNA与线性化的含有绿色荧光的载体连接,得到含有靶向敲除人BNIP3基因的sgRNA和绿色荧光蛋白基因的质粒载体,同时辅以一个含有编码cas9的辅助质粒,得到双质粒敲除载体系统。将双质粒敲除载体系统转入到人靶细胞中,筛选,得到敲除人BNIP3基因的细胞系。该细胞系可在人细胞中线粒体自噬和细胞凋亡研究中的应用。