本发明提供了一种转Bt基因棉花标准质粒及其应用,一种转Bt基因棉花标准质粒,由SEQ ID No.1(174bp)所示核苷酸片段与SEQ ID No.2(116bp)所示核苷酸片段经过拼接后,加入常见的酶切位点本发明提供的转Bt基因棉花标准质粒,生产方便、易扩增、操作简便、稳定性好、纯度较高、高效经济,解决了转Bt基因棉花和转Bt基因农作物检测中标准物质缺乏的难题,并且提供了一种准确、快速、简便、省时省力的转Bt基因农作物检测试剂盒,能够很好的达到转Bt基因作物定量分析检测,特别是定量PCR检测的目的。