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[发明专利]一种尿激酶分离纯化方法-CN201510782493.3有效
发明人：李尔华;顾京;陈爱秀 -专利权人：江苏尤里卡生物科技有限公司
申请日： 2015-11-16 - 公布日： 2016-01-13 - 主分类号： C12N9/72 文献下载
摘要：本发明涉及一种尿激酶分离纯化方法，其特征在于，其包含如下步骤，1）尿激酶的分离2）尿激酶的分离纯化所述的步骤1）具体包括以下步骤：a）男性尿液，在10℃以下，调节pH8.5，静置2小时，弃去沉淀，得上清液；b）取上清液，调pH5.0-5.5酸化，得酸化尿，通过硅藻土柱进行吸附；c）5℃冷水洗柱，以1%氨水和氯化钠进行洗脱，得洗脱液；d）洗脱液用饱和硫酸铵和4%氨水盐析，得尿激酶粗品；e）向沉淀中加入一定量的氨水，使沉淀中的尿激酶充分解离，得尿激酶溶液。
一种尿激酶分离纯化方法

[发明专利]一个银杏萜内酯合成路径中的甲羟戊酸激酶基因及其编码蛋白与应用-CN201810199297.7在审
发明人：许锋;宋启玲;陈强文;程水源;廖咏玲;叶家保;周忠诚 -专利权人：长江大学
申请日： 2018-03-12 - 公布日： 2018-09-04 - 主分类号： C12N15/54 文献下载
摘要：本发明公开了一种银杏萜内酯合成路径中甲羟戊酸激酶基因及其编码蛋白与应用。公开了所述基因的核苷酸序列和基因编码的蛋白质序列。组织表达分析显示银杏甲羟戊酸激酶基因在叶片中表达量最高，在开花器官中的表达量显著偏低。银杏甲羟戊酸激酶基因的酵母功能互补验证了银杏甲羟戊酸激酶基因编码的蛋白质具备甲羟戊酸激酶的酶活性，在萜内酯合成途径中行使催化功能。通过外源激素茉莉酸甲酯和水杨酸处理银杏植株，银杏甲羟戊酸激酶基因的表达量与萜内酯的含量均有提高。本发明所述的银杏甲羟戊酸激酶基因在银杏萜内酯合成路径中与萜内酯含量呈正相关性，该基因的过表达可以提高银杏中萜内酯含量。
甲羟戊酸激酶基因银杏萜内酯银杏萜内酯合成路径表达量编码蛋白甲羟戊酸激酶蛋白质序列核苷酸序列水杨酸处理茉莉酸甲酯表达分析催化功能合成途径基因编码外源激素酶活性基因植株酵母蛋白质叶片应用器官验证开花

[发明专利]一种尿激酶中间体的纯化方法-CN202010653775.4在审
发明人：顾京;唐维;倪萌;韩庆坤;黄俊杰 -专利权人：江苏尤里卡生物科技有限公司
申请日： 2020-07-08 - 公布日： 2020-09-11 - 主分类号： C12N9/72 文献下载
摘要：本发明提供了一种尿激酶中间体的纯化方法，涉及生物工程、化学工程领域。具体包括以下步骤：(1)取尿液、吸附，洗脱，收集洗脱液；(2)洗脱液进行沉淀，过滤，收集沉淀物，即得人尿激酶粗品；(3)取人尿激酶粗品，溶解，过滤后经葡聚糖凝胶层析，收集洗脱液，得到尿激酶中间体粗品；(4)取尿激酶中间体粗品，溶解后调节pH和电导，然后经过亲和琼脂糖凝胶层析柱，洗脱，收集洗脱液，即得高纯度尿激酶中间体。实施过程中采用亲和琼脂糖凝胶层析，结合其他工艺条件的优化，如平衡缓冲液配方、洗脱缓冲液配方、洗脱方法、pH、电导等，使最终得到的尿激酶的活性收率提高到90％以上，纯度提高到85％以上。
一种尿激酶中间体纯化方法

[发明专利]一种基于碳纳米材料荧光检测蛋白激酶A活性的方法-CN202010372431.6在审
发明人：范骁辉;冯婷婷 -专利权人：浙江大学
申请日： 2020-05-06 - 公布日： 2020-08-18 - 主分类号： C12Q1/48 文献下载
摘要：本发明属于生物分子检测技术领域，具体公开了一种基于碳纳米材料荧光检测蛋白激酶A活性的方法，包括：1)将已知活性的蛋白激酶A与对应的荧光标记多肽底物进行磷酸化反应，再加入碳纳米颗粒水溶液得到混合体系，检测混合体系的荧光强度并绘制蛋白激酶A活性与荧光强度的标准曲线；2)检测待测蛋白激酶A的荧光强度，根据标准曲线即可定量分析待测蛋白激酶A的活性。同时，本发明方法还可应用于蛋白激酶A抑制剂的筛选。本发明利用带有负电荷的水溶性的羧基碳纳米颗粒与带正电荷的肽段静电结合从而检测蛋白激酶A活性，该检测体系简单便捷、反应灵敏、特异性高且成本低，非常适合大规模推广应用。
一种基于纳米材料荧光检测蛋白激酶活性方法

[发明专利]一种粗品尿激酶的纯化方法-CN202010663049.0在审
发明人：顾京;郭芬;张茜;韩庆坤;熊心磊;丁晶 -专利权人：江苏尤里卡生物科技有限公司
申请日： 2020-07-10 - 公布日： 2020-09-15 - 主分类号： C12N9/72 文献下载
摘要：本发明提供了一种粗品尿激酶的纯化方法，涉及生物工程及化学工程领域，该纯化方法包括以下步骤：(1)将新鲜男性尿液加入硅胶吸附，用水冲洗硅胶，氨水洗脱，收集洗脱液，向洗脱液中加入固体硫酸铵进行沉淀，过滤收集棕色的尿激酶沉淀，即为人尿激酶粗品；(2)使用平衡缓冲液平衡层析柱，待紫外、pH和电导稳定后，将步骤(1)得到的人尿激酶粗品溶解并上样，经过滤、葡聚糖凝胶层析后，使用洗脱液进行洗脱至直至UV280nm0.1，收集洗脱液，得到尿激酶中间品；(3)使用异丙醇和NaOH溶液清洗层析柱，再用注射水冲洗至中性。从而实现了尿激酶粗品的高效回收，尿激酶的活性收率可达70％以上，满足量产经济效益要求。
一种尿激酶纯化方法

[发明专利]己糖激酶喷干粉的制备方法-CN201911099621.9在审
发明人：刘春卯;曹倩荣;郑翔;秦艳梅;马清河 -专利权人：河北省微生物研究所
申请日： 2019-11-12 - 公布日： 2020-01-10 - 主分类号： C12N9/96 文献下载
摘要：本发明属于酶制剂的制备，特别是指一种己糖激酶喷干粉的制备方法。按照公开号为CN106479992A中的方法制备己糖激酶纯酶液；在己糖激酶纯酶液中加入山梨醇、硫酸钠作为喷干保护剂，置于4℃保存3h，使保护剂充分溶解并在酶液中分布均匀；以进风口80℃、出风口65℃、进样速度为12转/分钟的条件对加有保护剂的酶液喷雾干燥得到白色己糖激酶喷干粉。本发明解决了目前己糖激酶直接进行喷雾干燥导致的失活率高的问题，具有己糖激酶喷干粉酶活保存率高、相对液态己糖激酶酶性质较稳定、符合国标中对于试剂盒的使用要求且更利于保存等优点。
己糖激酶干粉制备喷雾干燥保护剂纯酶液酶液硫酸钠喷干保护剂保存率出风口进风口酶制剂试剂盒保存国标进样酶活失活溶解

[发明专利]利用固定化提高纳豆激酶热稳定性的方法-CN202110389394.4在审
发明人：叶延欣;李蕾蕾;谢朝晖;洪军 -专利权人：河南城建学院
申请日： 2021-04-12 - 公布日： 2021-06-08 - 主分类号： C12N11/10 文献下载
摘要：本发明是采用固定化的方法提高纳豆激酶热稳定性，为解决现有纳豆激酶活性不稳定，酶分子容易失活的问题提供一种有效的解决途径，包括测定海藻酸钠浓度对包埋纳豆激酶的影响、测定CaCl2溶液浓度对包埋纳豆激酶的影响、测定聚乙二醇缩水甘油醚浓度对包埋纳豆激酶的影响，选取海藻酸钠浓度、CaCl2浓度、聚乙二醇缩水甘油醚浓度进行三因素三水平正交试验，然后用温度测试纳豆激酶的活性对比，最终实现以海藻酸钠为载体，采用海藻酸钠包埋和新型环氧交联剂乙二醇缩水甘油醚交联联合法固定纳豆激酶，提高其热稳定性的方法有较好的效果。
利用固定提高激酶热稳定性方法

[发明专利]一种重组巴斯德毕赤酵母发酵表达生产牛肠激酶（轻链）突变体工艺-CN202210975611.2在审
发明人：蒋路;邵国梁;徐登基;张婷 -专利权人：杭州浦泰生物科技有限公司
申请日： 2022-08-15 - 公布日： 2022-11-11 - 主分类号： C12P21/02 文献下载
摘要：本发明公开了一种重组巴斯德毕赤酵母发酵表达生产牛肠激酶(轻链)突变体工艺，本发明涉及生物技术相关领域，包括对肠激酶菌种进行平板划线培养，对培养的种子液进行摇瓶培养，对摇瓶培养的种子液进行发酵罐培养，添加补料进行目标蛋白诱导表达，本发明所开发的重组肠激酶(轻链)采用酵母表达，所得重组肠激酶(轻链)rEK纯度高、活性强、性价比优越具有很强的国际市场竞争力，通过在肠激酶(轻链)的N端增加了KR两个氨基酸，提高重组肠激酶rEK的分泌表达量；同时将野生型第203位的G突变为S，提高酶的催化效率，通过在肠激酶(轻链)的C端添加组氨酸标签，简化纯化工艺步骤，提高产品纯度。
一种重组巴斯德毕赤酵母发酵表达生产肠激酶突变体工艺

[发明专利]一种尿激酶的纯化方法-CN202211143616.5在审
发明人：顾京;唐维;王德军;熊心磊;肖蛟龙;杨展伟;赵宝营;熊倩;曾文;李成元;卢子龙 -专利权人：河南省尤里卡生物科技有限公司
申请日： 2022-09-20 - 公布日： 2022-11-25 - 主分类号： C12N9/72 文献下载
摘要：本发明公开了一种尿激酶的纯化方法，属于生物工程及化学工程领域。所述纯化方法包括以下步骤：取尿激酶粗品，加入乙醇、乙酸铵、磷酸钾溶液、乙酸钙溶液搅拌，得到尿激酶料液；在尿激酶料液中加入正丁酸铵溶液，离心过滤，得尿激酶上清液；将尿激酶上清液上吸附柱，用洗脱液Ⅰ洗脱吸附柱洗脱液上吸附柱，用洗脱液Ⅱ洗脱吸附柱，收集洗脱液；洗脱液上亲和层析柱，用洗脱液Ⅲ洗脱亲和层析柱，收集洗脱液；洗脱液经超滤膜，加入磷酸钾溶液超滤，得超滤液；超滤液加入乙醇醇沉，离心，留取沉淀物、淀物经冷冻干燥得尿激酶
一种尿激酶纯化方法

[发明专利]一种尿激酶吸附材料及其制备方法和应用-CN202211211533.5在审
发明人：顾京;熊心磊;王德军;李争;倪萌;丁晶;李乐枫;唐维;杨展伟;郭芬;金伟;肖蛟龙;李成元 -专利权人：河南省尤里卡生物科技有限公司
申请日： 2022-09-30 - 公布日： 2023-01-20 - 主分类号： B01J20/26 文献下载
摘要：本发明公开了一种尿激酶快速吸附材料及其制备方法和应用，所述尿激酶快速吸附材料的制备方法，包括：将硅胶与磷酸反应，洗涤干燥后，得到活化硅胶；将得到的活化硅胶与三甲氧基环氧硅烷和二苯乙烯反应，过滤，沉淀洗涤所述应用为尿激酶吸附材料在从人尿中吸附尿激酶粗品中的应用。本发明的尿激酶吸附材料为硅胶改性材料，其通过三甲氧基硅烷和二苯乙烯与硅胶发生交联、磺化制备而成，相比现有技术具有吸附速度快，吸附量大等优点，可直接放置于管道中吸附尿液中的尿激酶，不需要额外搅拌或酸化处理，简化了尿激酶的富集工艺，且制备方法简单，成本低，适合大规模生产。
一种尿激酶吸附材料及其制备方法应用

[发明专利]一种预测用于治疗肝癌的特异性治疗药物的方法-CN201810336436.6有效
发明人：薛宇;徐平;徐锋;王晨玮 -专利权人：华中科技大学鄂州工业技术研究院;华中科技大学
申请日： 2018-04-12 - 公布日： 2021-06-01 - 主分类号： G16C20/50 文献下载
摘要：所述方法包括：对肝癌样本进行蛋白质磷酸化组分析，获得磷酸化位点数据；去除所述磷酸化位点数据中的奇异点后进行归一化处理；对归一化处理后的磷酸化位点数据进行分析，获得激酶强度信息；根据所述激酶强度信息计算出在肝癌样本和正常肝组织中显著变化的激酶；根据所述显著变化的激酶在DrugBank数据库寻找对应的FDA批准药物，即显著上调激酶的抑制剂及显著下调激酶的激活剂。本发明能够快速准确的找出不同肝癌样本中的特异性药物靶点即显著激酶，从而得到特异性治疗药物。
一种预测用于治疗肝癌特异性药物方法

[发明专利]一种利用菜籽粕产纳豆激酶的纳豆芽孢杆菌及其应用-CN201310380442.9有效
发明人：陈力力;王雅君;廖杰琼;青文哲 -专利权人：湖南农业大学
申请日： 2013-08-28 - 公布日： 2013-11-27 - 主分类号： C12N1/20 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用菜籽粕产纳豆激酶的纳豆芽孢杆菌（Bacillus natto F22），其保藏号为：CGMCC7825，可应用于制备生产纳豆激酶的生物制剂。该菌株是以紫外线和微波诱变处理纳豆芽孢杆菌出发菌株，获得正突变紫外诱变菌株和微波诱变菌株作为基因组改组育种的亲本，采用基因组改组技术(genome shuffling)进行亲本菌株融合，以纳豆激酶的活力为考核指示，于以油脂加工副产物菜籽粕为基本氮源配制的发酵培养基中，反复筛选获得产纳豆激酶性能稳定的优良菌株。采用本发明方法选育的菌株，能利用菜籽粕作为营养基质生产纳豆激酶，能为纳豆激酶的工业化生产、菜籽粕的综合利用以及开发新的保健食品奠定基础。开辟了生产纳豆激酶的新途径。
一种利用菜籽粕产纳豆激酶豆芽杆菌及其应用

[发明专利]一种纳豆激酶肠溶胶囊及其制备方法-CN201210031516.3有效
发明人：刘会洲;魏雪团;罗明芳;谢渝春;李昊剑;杨良嵘 -专利权人：中国科学院过程工程研究所
申请日： 2012-02-13 - 公布日： 2013-08-14 - 主分类号： A23L1/29 文献下载
摘要：本发明涉及保健食品领域，具体地，本发明涉及一种纳豆激酶肠溶胶囊及其制备方法。本发明的纳豆激酶肠溶胶囊，其中，所述胶囊外包有甲基丙烯酸-丙烯酸乙酯-共聚物包衣，胶囊纳豆激酶冻干粉含量为0.15-0.2g/粒，纳豆激酶活性为600-800FU/粒；其中，所述纳豆激酶冻干粉经由鹰嘴豆纳豆食品制备获得本发明的纳豆激酶肠溶胶囊在模拟胃酸环境中不崩解，保持良好的外观，酶活无损失，在模拟肠道环境中缓慢释放，8h达到完全释放。解决了纳豆激酶胃酸失活问题，并实现其在肠道环境中的控制释放。
一种激酶溶胶及其制备方法

[发明专利]纳豆激酶口服液及其制造方法-CN200510000158.X有效
发明人：王涛;张振中;张锋;金兆祥;谭振波;翟长宝;薛峰;尚青 -专利权人：张振中;王涛
申请日： 2005-01-05 - 公布日： 2006-07-12 - 主分类号： A61K38/43 文献下载
摘要：本发明涉及一种纳豆激酶口服液，由产纳豆激酶的枯草杆菌的发酵液制备而成，其中含有0.5－3％的环状糊精或环糊精衍生物，每毫升口服液中的纳豆激酶纤溶活性为100－400IU。本发明同时还提供了一种纳豆激酶口服液的制造方法，包括以下步骤：(1)利用产纳豆激酶的枯草杆菌制备纳豆激酶发酵液；(2)离心，去除发酵液中的菌体和杂质；(3)离心后的上清液，采用砂棒过滤器进行进行脱炭处理本发明的纳豆激酶口服液口感好，服用方便，对心脑血管具有很好的保健作用。
激酶口服液及其制造方法

[发明专利]一种含有丙氨酸的类肽类化合物以及其制备方法和应用-CN201910049081.7有效
发明人：张杰;潘晓艳;梁丽媛;卢闻;王嗣岑;贺浪冲;司茹;王瑾 -专利权人：西安交通大学
申请日： 2019-01-18 - 公布日： 2020-08-18 - 主分类号： C07D213/75 文献下载
摘要：一种含有丙氨酸的类肽类化合物及其制备方法和应用，采用基于片段的药物设计策略，以联苯吡啶为铰链区结合片段，引入L‑丙氨酸为柔性Linker，以构建具有激酶抑制活性的类肽类化合物库，并通过ADP‑Glo的激酶活性筛选发现具有Bcr‑Abl激酶抑制活性的酪氨酸激酶抑制剂。该化合物能够用于制备抗肿瘤药物中，具有抑制Bcr‑Abl、Bcr‑AblT315I激酶活性，对K562细胞具有细胞增值抑制活性。引入丙氨酸，可以扩展Bcr‑Abl激酶抑制剂的结构多样性，活性试验显示丙氨酸Linker对化合物的抑制活性具有重要作用，能够提高受体与化合物之间的亲和力，可以作为Bcr‑Abl酪氨酸激酶抑制剂的药效片段
一种含有丙氨酸类肽类化合物及其制备方法应用