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[发明专利]甘蔗悬浮单细胞系原生质体的分离纯化及培养方法-CN202310483648.8在审
发明人：李素丽;王瑞;张德梅;袁帅;李馨竹 -专利权人：广西大学
申请日： 2023-04-28 - 公布日： 2023-08-15 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，提供甘蔗悬浮单细胞系原生质体的分离纯化及培养方法，包括：愈伤组织的诱导及继代培养；胚性悬浮细胞的获取；悬浮单细胞的获取；指数生长期的细胞团的获取；原生质体的制备；原生质体的纯化；原生质体的培养；在将悬浮单细胞进行分化酶解时，以指数生长期的细胞团进行原生质体的酶解，酶解过程优选了不同的酶液、酶液浓度条件，获得产量和活力较高的原生质体；在获得纯化的原生质体后，通过优化渗透压、激素组合、激素浓度等条件培养原生质体，分裂频率达25.08％、植板率达14.52％。本发明利用甘蔗的单细胞悬浮系获得原生质体，为甘蔗悬浮单细胞原生质体培养、体细胞杂交及其他遗传改良研究奠定了基础。
甘蔗悬浮细胞系原生质体分离纯化培养方法

[发明专利]一种橡胶树原生质体培养植株再生的方法-CN201310291166.9无效
发明人：戴雪梅;周权男;黄华孙;华玉伟;李哲;黄天带;孙爱花 -专利权人：中国热带农业科学院橡胶研究所
申请日： 2013-07-11 - 公布日： 2013-09-18 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种橡胶树原生质体培养植株再生的方法，包括胚性细胞悬浮系的建立、原生质体的分离和纯化、原生质体的看护培养、原生质体再生细胞克隆的继代增殖、体细胞胚的诱导及植株再生。本发明提供的橡胶树原生质体分离纯化的方法简单易行，原生质体看护培养所用的看护培养基成分大为简化，并采用橡胶树自身品种的悬浮细胞系作为看护细胞，极大降低了生产成本，而且有效提高了橡胶树原生质体分裂形成细胞克隆的频率及其后体细胞胚发生的频率为利用原生质体融合（即体细胞杂交）和遗传转化等这些具有重大应用前景的生物技术育种方式进行橡胶树品种改良和种质创新提供良好的受体系统。
一种橡胶树原生质体培养植株再生方法

[发明专利]岭南药用植物穿心莲原生质体的制备及应用-CN202111003791.X在审
发明人：靳红磊;周怡宁;王宏斌 -专利权人：广州中医药大学（广州中医药研究院）
申请日： 2021-08-30 - 公布日： 2021-11-05 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明属于原生质体制备技术领域，具体涉及岭南药用植物穿心莲原生质体的制备及应用。本发明提供了一种原生质体酶解液，可以更好地将细胞壁去除，使细胞游离出来，同时细胞维持很好的生理状态，并且利用原生质体进行转染时，调整甘露醇浓度，维持细胞渗透压，减少了原生质体在转染过程中的皱缩或涨破，保证了原生质体的细胞形态利用本发明所述酶解液能够缩短原生质体制备时的酶解时间，保证了原生质体的高活性和高产量，可用于基因瞬时表达研究。
岭南药用植物穿心莲原生质体制备应用

[发明专利]一种棉花保卫细胞原生质体的分离方法-CN201410371954.3有效
发明人：张骁;赵翔;孔培涛;王雪娇;高歌 -专利权人：河南大学
申请日： 2014-07-31 - 公布日： 2017-01-11 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明具体涉及一种棉花保卫细胞原生质体的分离方法。该方法包括诱导棉花种子萌发、酶解分离保卫细胞原生质体、离心等步骤。本发明所提供的棉花保卫细胞原生质体的分离方法，对棉花叶片的保卫细胞采用一步酶解法，与两步酶解法相比大大缩短了实验时间，简化了实验操作流程，提高了实验效率，而且保持了原生质体较高的生理活力，更解决了棉花保卫细胞原生质体分离的难题棉花保卫细胞原生质体的成功分离，为研究保卫细胞膜通透性、离子转运以及气孔运动机理提供了较好的实验基础。
一种棉花保卫细胞原生质体分离方法

[发明专利]一种快速高通量检测赤芝原生质体细胞壁再生的方法及其应用-CN202310392047.6在审
发明人：邓意达;石沐玲;洪超;黄露;米旭君 -专利权人：海南大学
申请日： 2023-04-12 - 公布日： 2023-07-14 - 主分类号： G01N33/569 文献下载
摘要：本发明属于食用菌育种技术领域，具体涉及一种利用流式细胞术测定赤芝原生质体细胞壁再生的方法及其应用；将TPFN荧光探针用于赤芝原生质体的流式荧光标记，从而区分原生质体与细胞壁再生的原生质体，并可通过流式数据处理实现对原生质体细胞壁再生过程的量化监测将待测原生质体与探针孵育10分钟，再通过流式细胞仪的BluFL2通道采集数据，与对照样品的荧光强度直方图相比较，则可判断细胞壁再生程度。与传统的电镜成像方法相比，本发明能够在15分钟内实现细胞数大于5000个的原生质体样品分析，可发展为快速判断原生质体活性的方法以及细胞壁再生监测的手段，为灵芝育种以及灵芝细胞壁相关的生理代谢研究提供重要工具
一种快速通量检测原生质体细胞壁再生方法及其应用

[发明专利]一种山药原生质体的制备及纯化方法-CN201410652045.7在审
发明人：张敏跃 -专利权人：张敏跃
申请日： 2014-11-18 - 公布日： 2015-02-18 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种山药原生质体制备及纯化方法。选取山药幼叶，消毒处理；将叶片切成细条放入酶解液，黑暗条件下酶解去除细胞壁；酶解混合物在水平摇床上处理，充分释放原生质体；然后用尼龙网膜将酶解混合物过滤至离心管，过滤产物离心后弃上清，加入洗涤液，轻缓颠倒使细胞悬浮；离心分离原生质体，去上清，加入原生质体保存液，重新悬浮细胞后静置，使原生质体自然沉降；最后吸取上层细胞悬液，得到纯化的山药原生质体。本发明原材料易得，消毒方法对外植体的损伤较小，消毒效果好，污染率低；针对山药叶片特性优化了酶解体系和条件，获得的原生质体产量大，活性高；采用自然沉降的方法，可减少细胞碎片等杂质，获得较高纯度的原生质体。
一种山药原生质体制备纯化方法

[发明专利]一种麒麟菜属海藻原生质体分离培养和再生植株的方法-CN201110003493.0有效
发明人：刘涛;张偲;金月梅 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2011-01-10 - 公布日： 2011-08-10 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种麒麟菜属海藻原生质体分离培养和再生植株的方法，其主要是根据海藻体细胞发育的全能性，利用海藻工具酶分解麒麟菜组织，游离出体细胞原生质体，获得再生细胞壁的体细胞和细胞系，然后将其培养得到再生植株本发明利用体细胞原生质体直接进行育苗，无须培育麒麟菜生殖成熟的藻体；体细胞原生质体再生细胞壁转化为体细胞，相对于有性生殖育苗技术，无须生殖细胞的有性生殖过程，缩短了育苗周期；并且苗种繁育效率高，适合于大规模育苗生产
一种麒麟海藻原生质体分离培养再生植株方法

[发明专利]一种番茄叶片保卫细胞原生质体分离的方法-CN201710011161.4在审
发明人：王绍辉;赵文超;姚学辉;杨瑞;王建立;赵福宽 -专利权人：北京农学院
申请日： 2017-01-06 - 公布日： 2017-04-05 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种番茄叶片保卫细胞原生质体分离的方法，是将含有保卫细胞的番茄叶片表皮组织进行酶解取其中的保卫细胞原生质体。本发明通过改进酶液中相关酶的种类、浓度及酶解需要的温度、转速条件，成功的分离到番茄叶片保卫细胞原生质体。本发明的方法特适用于番茄中，得到的原生质体活性较好，为进一步研究保卫细胞的细胞感应与信号转导研究中奠定基础。
一种番茄叶片保卫细胞原生质体分离方法

[发明专利]缢江蓠原生质体的制备方法-CN201610161826.5有效
发明人：刘涛;张磊 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2016-03-22 - 公布日： 2019-04-16 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了缢江蓠原生质体制备的方法，研究了海洋动物提取酶对缢江蓠组织的解离效果，建立了缢江蓠原生质体制备方法，分离出缢江蓠体细胞原生质体。本发明的优点是成功获得了缢江蓠的原生质，可以应用于细胞壁和细胞质膜功能的研究、种间细胞杂交、遗传工程研究等领域。
江蓠原生质体制备方法

[发明专利]一种用于单细胞转录组测序的亚洲棉根尖细胞与叶肉细胞原生质体的解离方法-CN202110181753.7有效
发明人：刘乾坤;李鹏涛;韦洋洋;程爽;刘玉玲;卢全伟;周忠丽;蔡小彦;王玉红;刘方;彭仁海 -专利权人：安阳工学院;中国农业科学院棉花研究所
申请日： 2021-02-09 - 公布日： 2023-06-23 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种用于单细胞转录组测序的亚洲棉根尖细胞与叶肉细胞原生质体的解离方法，该方法包括亚洲棉种子的萌发、组织培养、酶解解离原生质体、离心收集原生质体以及显微观察鉴定等步骤。本发明从亚洲棉的根尖和叶片所解离的原生质体浓度较高(高于3000cells/μL)，且活率不低于92％，完全符合10×Genomics单细胞转录组测序的上机要求。因此本发明得出的根尖与叶片解离原生质体的方法，更好的解决了亚洲棉根尖细胞与叶肉细胞原生质体解离困难以及活率低的难题，从而可以更好的研究棉花抗逆过程特定基因的表达，对于棉花的遗传发育与培育抗逆棉花的品种至关重要
一种用于单细胞转录组测序亚洲根尖细胞叶肉原生质体解离方法

[发明专利]产生单克隆植物细胞系的方法-CN201180071503.2有效
发明人：珍娜·基尔霍夫;史蒂芬·雪勒伯格;安德烈斯·席尔迈尔;海尔格·辛克尔;莱纳·费希尔 -专利权人：弗劳恩霍夫应用研究促进协会
申请日： 2011-06-07 - 公布日： 2017-05-24 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供一种由植物细胞的异种群体产生单克隆植物细胞系的方法，其包含下列步骤（a）提供植物细胞的异种群体；（b）由该植物细胞的异种群体制备原生质体；（c）通过将原生质体制备物进行流式细胞分选而分离单一原生质体；（d）在饲养细胞材料存在的情况下，通过共培养使分离的单一转化原生质体再生直到形成小集落；（e）将小集落从饲养细胞材料中转移，并培养小集落直到形成单克隆植物细胞系。
产生单克隆植物细胞系方法

[发明专利]一种新型植物原生质体看护培养方法-CN03143416.9无效
发明人：陈利萍 -专利权人：浙江大学
申请日： 2003-09-27 - 公布日： 2004-10-20 - 主分类号： C12N15/05 文献下载
摘要：本发明公开了一种植物细胞的培养方法，旨在提供一种新型植物原生质体看护培养方法。该方法包括对看护培养植物细胞和被看护培养植物细胞分别进行原生质体分离后分别在液体培养基中培养，使原生质体长出新的细胞壁。然后将含有两种植物原生质体的培养基按一定比例混匀，再以琼脂糖固化并进行暗培养。本发明可以利用已经建立的原生质体高效再生体系去看护另一物种的原生质体，并使得被看护物种的原生质体能快速、高效地再生。
一种新型植物原生质体看护培养方法

[发明专利]产生原生殖细胞和转基因动物物种的方法-CN97180552.0无效
发明人： J·A·皮德拉希塔;F·W·巴泽尔 -专利权人：得克萨斯农业及机械体系综合大学
申请日： 1997-10-10 - 公布日： 2000-01-12 - 主分类号： C12N5/06 文献下载
摘要：被公开的是分离原生殖细胞的方法,培养这些细胞以产生原生殖细胞衍生的细胞系的方法,转化所述原生殖细胞和所述培养细胞系的方法,和使用这些被转化细胞和细胞系产生转基因动物的方法。
产生生殖细胞转基因动物物种方法

[发明专利]一种促进水稻多细胞融合的方法-CN201711499314.0在审
发明人：张国栋;刘佳音;刘鹏飞;徐春莹;葛旭娟;米铁柱 -专利权人：青岛袁策生物科技有限公司
申请日： 2017-12-31 - 公布日： 2018-09-21 - 主分类号： C12N5/14 文献下载
摘要：本申请公开了一种促进水稻多细胞融合的方法，利用不同品种水稻种子的成熟胚，诱导出愈伤组织；酶解获得原生质体，将原生质体混合，利用高分子PEG结合高pH‑高Ca2+洗脱法，诱导细胞融合；最后利用AFLP技术筛选杂合体组成，从而得到多细胞融合杂种。包括以下步骤：A.愈伤诱导；B.酶解；C.收集细胞；D.细胞融合；E.原生质体植板培养；F.杂合体分子鉴定。本发明利用原生质体融合技术，使多个水稻品种的原生质体彼此融合，形成多细胞杂种并诱导培养出多倍体的方法。
细胞融合原生质体杂合体酶解多倍体原生质体融合技术水稻分子鉴定技术筛选品种水稻水稻品种细胞杂种诱导培养诱导细胞愈伤诱导愈伤组织融合成熟胚洗脱植板诱导细胞申请

[发明专利]一种卡帕藻属海藻原生质体分离培养和再生植株的方法-CN201110003481.8无效
发明人：刘涛;张偲;金月梅 -专利权人：中国海洋大学
申请日： 2011-01-10 - 公布日： 2011-08-24 - 主分类号： A01H4/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种卡帕藻属海藻原生质体分离培养和再生植株的方法，其主要是根据海藻体细胞发育的全能性，利用海藻工具酶分解卡帕藻组织，游离出体细胞原生质体，获得再生细胞壁的体细胞和细胞系，然后将其培养得到再生植株本发明利用体细胞原生质体直接进行育苗，无须培育卡帕藻生殖成熟的藻体；体细胞原生质体再生细胞壁转化为体细胞，相对于有性生殖育苗技术，其优点是无须生殖细胞的有性生殖过程，缩短了育苗周期；并且苗种繁育效率高，
一种卡帕藻属海藻原生质体分离培养再生植株方法

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