本发明属于基因工程技术领域,具体涉及一种重组表达载体、云芝糖蛋白Musarin的制备方法及应用。本发明提供了一种重组表达载体,包括出发载体和编码云芝糖蛋白Musarin的基因;所述云芝糖蛋白Musarin包括如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列。本发明以编码所述云芝糖蛋白Musarin的基因和出发载体为原料制备得到的重组表达载体可用于云芝糖蛋白Musarin的体外表达,无需提取步骤,成功富集云芝糖蛋白Musarin,节省了云芝糖蛋白Musarin的制作成本,高效获得云芝糖蛋白Musarin。