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[发明专利]一种具有粘附-抗冻双功能的二嵌段融合蛋白及合成方法和应用-CN201910951884.1有效
发明人：张雷;杨静;张相宇;高弈航 -专利权人：天津大学
申请日： 2019-10-09 - 公布日： 2022-03-15 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明涉及一种具有粘附‑抗冻双功能的二嵌段融合蛋白及合成方法和应用；以基因工程为技术手段，制备一种同时含有抗冻蛋白基因与黏附蛋白基因的基因表达载体，并将其转化入宿主细胞，通过诱导剂使其过量表达此蛋白，分离纯化获得融合蛋白融合蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.3，核苷酸序列为SEQ ID NO.4。将贻贝粘附蛋白和抗冻蛋白在基因水平上进行融合，构建了具有粘附‑抗冻双功能的二嵌段融合蛋白；利用大肠杆菌发酵表达融合蛋白，利用亲和层析技术纯化上清蛋白，利用乙酸纯化包涵体，构建了高纯度的分离纯化方法，实现了微生物一步法合成融合蛋白
一种具有粘附抗冻双功能二嵌段融合蛋白合成方法应用

[发明专利]一种高纯度CRISPR-Cas9蛋白的酶切方法-CN202110213884.9在审
发明人：李森;张伦;孙伟;韦伟洋 -专利权人：通用生物系统（安徽）有限公司
申请日： 2021-02-25 - 公布日： 2021-06-15 - 主分类号： C12N15/70 文献下载
摘要：本发明公开了一种高纯度CRISPR‑Cas9蛋白的酶切方法，第一步、载体构建：合成RGP基因，并克隆至自行改造pGreat‑M载体，完成载体构建；第二步、载体蛋白表达和纯化：使用组合形纯化标签His+MBP+TEV+Cas9进行载体蛋白表达和多步纯化条件优化；第三步、高浓度和纯度纯化方案设计：使用自行优化的培养基培养，MBP柱进行纯化，His‑TEV酶进行酶切，通过Ni柱反筛，分子筛和离子柱多步纯化，并进行HPLC检测；第四步、基因敲除酶切体系条件构建和效率优化：包括SSA活性检测、体外切割活性验证、内源活性检测，本研究保证了高水平和高活性蛋白酶的获得，使得Cas蛋白活性得到高效发挥。
一种纯度 crispr cas9 蛋白方法

[发明专利]一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法-CN201610367604.9有效
发明人：叶学君;吴思恒;余燕;郜富权;兰万军;陈静山;张桂涛 -专利权人：广州太力生物医药科技有限公司
申请日： 2016-05-27 - 公布日： 2021-11-19 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明公开了一种长效人促红细胞生成素融合蛋白的纯化方法，包括如下步骤：(1)通过培养CHO工程细胞获得rhEPO‑Fc融合蛋白的细胞培养液；(2)将步骤(1)得到的CHO细胞培养液经深层过滤后采用MabselectSuRe亲和层析进行纯化；(3)将步骤(2)粗纯化得到的rhEPO‑Fc融合蛋白液采用Capto adhere复合型阴离子交换层析进行进一步纯化，得到高纯度的rhEPO‑Fc融合蛋白液。本发明通过Mabselect SuRe‑Capto adhere两步纯化工艺纯化rhEPO‑Fc融合蛋白，得到高纯度的rhEPO‑Fc，样品经临床前药理毒理学研究，其半衰期比EPO延长了近5倍，而且安全
一种长效红细胞生成融合蛋白纯化方法

[发明专利]一种蛋白质分离纯化的规模化生产方法-CN202010909516.3在审
发明人：鞠妍;王青竹;涂亚斌;高允乐;高宏雷;刘景利;张峣;王晓龙 -专利权人：哈尔滨维科生物技术有限公司
申请日： 2020-09-02 - 公布日： 2020-12-25 - 主分类号： C07K1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种蛋白质分离纯化的规模化生产方法，属于蛋白质生物工程技术领域。本发明解决现有硫酸铵沉淀方法分离纯化蛋白质无法实现产业化的问题。本发明采用中空纤维柱式超滤装置循环替代硫酸铵沉淀后的离心和沉淀复溶的操作步骤，使硫酸铵沉淀在生产中更容易被放大且提高其纯化效率，去除更多杂质蛋白,在满足高纯度蛋白质制备的同时，达到大量蛋白质的分离纯化目的解决了在大规模化分离纯化蛋白质时存在的除硫酸铵沉淀法外其他粗纯方法很难将含有多种蛋白质的样品进行有效分离，对后续离子交换层析造成负担，进而导致后续纯化效率低或难以进行的问题，以及现有硫酸铵沉淀在大规模化生产中存在的较大成本投入以及后续维护成本高的问题
一种蛋白质分离纯化规模化生产方法

[发明专利]纯化聚乙二醇化蛋白质的方法-CN201710713355.9在审
发明人： M.K.D.韦恩达尔;L.塞耶斯加尔德;A.博格斯内斯 -专利权人：诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司
申请日： 2010-11-24 - 公布日： 2017-11-24 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明涉及通过从含有聚乙二醇化蛋白质的样品中去除杂质来纯化聚乙二醇化蛋白质(特别是，但不专指维生素K依赖性凝血因子例如因子IX (FIX))的方法，涉及用所述方法纯化的蛋白质，以及涉及所述纯化后的蛋白质在治疗中的用途，特别但并非唯一地涉及所述纯化后的蛋白质在用于治疗由凝血因子减轻的疾病中的用途，所述治疗例如血友病的预防性治疗。
纯化聚乙二醇蛋白质方法

[发明专利]一种高纯度胰蛋白酶的制备方法-CN201510102484.5有效
发明人：黄臻辉;汪雅雯;周伟洁 -专利权人：上海上药第一生化药业有限公司
申请日： 2015-03-09 - 公布日： 2017-11-24 - 主分类号： C12N9/76 文献下载
摘要：本发明公开了一种高纯度胰蛋白酶的制备方法。该制备方法包括以下步骤(1)粗品溶解；(2)低pH孵放法灭活病毒；(3)疏水层析纯化；(4)酶原活化；(5)亲和层析纯化；(6)洗脱液除盐；(7)膜过滤去除病毒；(8)真空冷冻干燥，即得所述的高纯度胰蛋白酶本发明的制备方法采用疏水层析纯化胰蛋白酶原，酶原激活后，亲和层析纯化胰蛋白酶，工艺较为简便，可以得到高纯度、高效价的胰蛋白酶。
一种纯度胰蛋白酶制备方法

[发明专利]天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的纯化方法-CN201110339033.5有效
发明人：叶曼;陈昊;张耀洲;陈剑清;舒特俊 -专利权人：特菲(天津)生物医药科技有限公司
申请日： 2011-11-01 - 公布日： 2012-03-14 - 主分类号： C07K14/81 文献下载
摘要：本发明属于一种天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的纯化方法，方法包括蚕蛹预处理，天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的初步分离纯化，天然丝氨酸蛋白酶抑制剂的分离纯化的步骤。本发明能利用蚕蛹作为原料，通过分离纯化获得具有药用价值的蚕蛹中天然丝氨酸蛋白酶抑制剂，该方法操作简便，且产量高，适用于大规模生产，提纯的天然丝氨酸蛋白酶抑制剂可作为保健药物，无毒副作用。
天然丝氨酸蛋白酶抑制剂纯化方法

[发明专利]纯化聚乙二醇化蛋白质的方法-CN201080053284.0在审
发明人： M.K.D.韦恩达尔;L.塞耶斯加尔德;A.博格斯内斯 -专利权人：诺沃—诺迪斯克保健股份有限公司
申请日： 2010-11-24 - 公布日： 2012-08-15 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明涉及通过从含有聚乙二醇化蛋白质的样品中去除杂质来纯化聚乙二醇化蛋白质(特别是，但不专指维生素K依赖性凝血因子例如因子IX(FIX))的方法，涉及用所述方法纯化的蛋白质，以及涉及所述纯化后的蛋白质在治疗中的用途，特别但并非唯一地涉及所述纯化后的蛋白质在用于治疗由凝血因子减轻的疾病中的用途，所述治疗例如血友病的预防性治疗。
纯化聚乙二醇蛋白质方法

[发明专利]一种分离纯化高纯度猪圆环病毒Cap蛋白的层析方法-CN201610850930.5在审
发明人：刘为涛;易国军 -专利权人：武汉汇研生物科技股份有限公司
申请日： 2016-09-26 - 公布日： 2017-02-22 - 主分类号： C07K14/01 文献下载
摘要：本发明涉及一种分离纯化高纯度猪圆环病毒Cap蛋白的层析方法，包括以下步骤：S1：将表达猪圆环病毒Cap蛋白的昆虫细胞破碎离心后，取上清用孔径为0.45μm的滤膜过滤，得到包含猪圆环病毒Cap蛋白的原样品液；S2：使原样品液通过弱阴离子交换层析，得到第一纯化液；S3：使第一纯化液通过强阳离子交换层析，得到第二纯化液；S4：使第二纯化液经历凝胶过滤层析，得到高纯度猪圆环病毒Cap蛋白溶液。该方法可去除从表达猪圆环病毒Cap蛋白的昆虫细胞得到的粗原样品液中的DNA、色素和宿主细胞蛋白，并且将猪圆环病毒Cap蛋白大大浓缩，从而得到高纯度、高浓度的猪圆环病毒Cap蛋白，有利于提高Cap蛋白的免疫原性和反应原性
一种分离纯化纯度圆环病毒 cap 蛋白层析方法

[发明专利]一种易于纯化的人表皮生长因子融合蛋白及其核酸分子、一种人表皮生长因子制备方法-CN201910620909.X在审
发明人：钱永常 -专利权人：杭州纽龙日尚生物制品有限公司
申请日： 2019-07-10 - 公布日： 2019-10-22 - 主分类号： C07K19/00 文献下载
摘要：本发明提供一种易于纯化的人表皮生长因子融合蛋白及其核酸分子、一种人表皮生长因子制备方法，涉及生物工程技术领域，所述融合蛋白，包括金属螯合亲和蛋白、C端可自切的多肽和hEGF。所述融合蛋白在变性条件下具有金属螯合特异性结合的能力，当融合蛋白与金属特异性结合后改变变性条件使融合蛋白复性，复性的融合蛋白能自行切割，获得成熟的53个氨基酸组成的rhEGF，不含多余的其他氨基酸。本发明构建的融合蛋白易于纯化，与常规纯化方式相比，在确保纯度高的情况下有效的简化了纯化流程，降低hEGF生产成本。本发明提供了人表皮生长因子的制备方法，仅需一步即可完成纯化，有效简化了蛋白分离的步骤，提高生产效率、节约成本。
融合蛋白人表皮生长因子制备特异性结合变性条件核酸分子金属螯合复性生物工程技术领域氨基酸组成常规纯化蛋白分离亲和蛋白生产效率氨基酸多肽构建生产成本切割金属节约成熟

[发明专利]一种高活性重组蛋白的制备方法-CN202110942425.4在审
发明人：张朔;冯铃;刘辉;李雪娇;赵航;刘畅;张鹏;赵洪礼;何伟 -专利权人：沈阳百发科技有限公司;沈阳眼产业技术研究院有限公司;辽宁何氏医学院
申请日： 2021-08-17 - 公布日： 2021-10-15 - 主分类号： C07K1/18 文献下载
摘要：本发明涉及重组蛋白纯化技术领域，特别涉及一种高活性重组蛋白的制备方法。该制备方法包括如下步骤：将重组蛋白的HPLC纯化样品与蛋白溶解液混合，进行溶解处理；将溶解处理后的样品与复性液混合，进行复性处理；采用阴离子交换层析柱对复性处理后样品进行纯化，得到高活性重组蛋白。本发明通过对蛋白溶解液和复性液的配方进行了改进，进一步解决了通过HPLC纯化的重组蛋白丧失生物活性的问题，制备出高活性、高纯度的重组蛋白样品，同时操作简单，无内毒素和有机溶剂残留，适合视网膜新生血管治疗使用
一种活性重组蛋白制备方法

[发明专利]蛋白质分离纯化的方法及回收装置-CN201310296231.7有效
发明人：王星 -专利权人：淄博云桥生物技术有限公司
申请日： 2013-07-15 - 公布日： 2017-08-11 - 主分类号： C07K1/26 文献下载
摘要：本发明属于蛋白质分离纯化领域，具体涉及一种蛋白质分离纯化的方法及回收装置，包括等电聚焦电泳和SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳，在等电聚焦电泳中不使用还原剂，在SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳中凝胶用含有SDS的缓冲液处理蛋白质分离纯化的回收装置包括蛋白质洗脱板和分子半透膜，蛋白质洗脱板底部通过喷胶粘有分子半透膜。本发明能够有效地分离复杂的蛋白质混合物为单一的蛋白质。本发明提高了蛋白质的分离和纯化效率并且保持了蛋白质的功能或酶活性，操作简便。
蛋白质分离纯化方法回收装置

[发明专利]细胞核质转移受体蛋白13多克隆抗体制备方法-CN200610005385.6无效
发明人：陶涛;彭梓 -专利权人：厦门大学
申请日： 2006-01-19 - 公布日： 2006-07-26 - 主分类号： C12N1/21 文献下载
摘要：核质转移蛋白受体13蛋白的表达、纯化及其抗体制备方法，涉及一种蛋白表达、纯化及抗体制备，尤其是涉及一种核质转移蛋白受体13(imp 13)抗体的制备方法。提供一种以在生物体内合成的有生物活性的imp 13的全长蛋白做抗原制备核质转移受体蛋白13抗体的方法。步骤为：将全长importin 13基因插入到表达质粒pGEX－4T－2，然后转化到大肠杆菌中，在BL21中表达目的蛋白；经层析法纯化得到有生物活性的蛋白：用纯化后的蛋白做抗原去免疫兔子，得到了imp
细胞核质转移受体蛋白 13 克隆抗体制备方法

[发明专利]一种快速纯化糖化白蛋白粗溶液的方法-CN201510036280.6在审
发明人：连国军;陶国锋 -专利权人：上虞市创烨生物有限公司
申请日： 2015-01-26 - 公布日： 2015-06-24 - 主分类号： G01N1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种快速纯化糖化白蛋白粗溶液的方法，其通过以下步骤完成：1)将糖化白蛋白粗溶液进行低温离心，取上清溶液；2)将上清溶液转移至切向流过滤系统进行浓缩处理，获得粗浓缩糖化白蛋白溶液；3)在切向流过滤系统中进行洗脱处理，脱除粗浓缩糖化白蛋白溶液中的糖化多肽、糖化氨基酸、葡萄糖；4)用缓冲液稀释纯化后的糖化白蛋白溶液至所需浓度。按该法进行糖化白蛋白粗溶液的纯化，可快速去除糖化多肽等小分子杂质，具有操作简单、方便、快捷等特点，适合大规模的糖化白蛋白粗溶液纯化。
一种快速纯化糖化白蛋白溶液方法

[发明专利]鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的提取与纯化方法-CN201110141705.1有效
发明人：宋志忠;杜春红;石丽媛;王鹏;杨光璨;钟佑宏;董珊珊 -专利权人：云南省地方病防治所
申请日： 2011-05-30 - 公布日： 2011-12-21 - 主分类号： C12N9/52 文献下载
摘要：本发明涉及一种鼠疫菌纤溶酶原激活因子Pla的提取与纯化方法，该方法包括：将鼠疫菌体经溶菌酶处理，然后经超声破碎，再进行硫酸铵盐析，得到粗提Pla蛋白；粗提Pla蛋白采用羟基磷灰石层析柱进行层析纯化，其中在上样缓冲液中加入Ca离子，洗脱时先采用磷酸盐缓冲液梯度洗脱，以去除非目的蛋白，再用1N??NaOH洗脱目的蛋白，收集样品后用Tris-Cl缓冲液透析，去除NaOH，得到纯化Pla蛋白，并经质谱分析得以证实。本发明还提供了按照所述方法提取纯化得到的Pla蛋白制品。本发明的方法易于操作，所得蛋白丰度高、纯度高。
鼠疫菌纤溶酶原激活因子 pla 提取纯化方法