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[发明专利]一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法-CN201110000356.1无效
发明人：陈强;李雪梅;佟艳丰;李国德;王泽;毕晓华 -专利权人：沈阳师范大学
申请日： 2011-01-04 - 公布日： 2011-08-31 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：一种观察花粉管萌发和生长的动态发育过程的方法，本发明选用中性红作为染色剂对植物花粉进行染色，通过采集花粉、配制培养基、中性红梯度染色液的配置、花粉培养小室的制备、花粉的撒布、花粉培养条件的控制及显微镜观察花粉管萌发和花粉管生长的动态发育过程染色后花粉管的萌发率和花粉管生长与不染色对照组基本一致，花粉仍然具有群体效应。本发明具有快速、简便、稳定及观察效果好等特点，并可直接观察到花粉管的萌发和花粉管生长的动态发育过程。
一种观察花粉管萌发生长动态发育过程方法

[发明专利]一种花粉管尖端超薄切片的方法-CN201710567283.1有效
发明人：屈海泳;管押琴;王永章;原永兵;李坤;刘静;胡珊珊 -专利权人：青岛农业大学
申请日： 2017-07-12 - 公布日： 2020-02-04 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，尤其涉及一种花粉管尖端超薄切片的方法，包括以下步骤：花粉培养，花粉管固定、洗涤，花粉管样品切割，花粉管尖端的离心、凝固，琼脂凝固花粉管尖端样品块的洗涤，包埋剂配置，浸泡液配置，浸透，包埋、聚合和切片处理，本发明方法其操作简单，可有效的得到花粉管尖端切片，其操作效率高，得到的花粉管尖端切片经过染色观察呈三角形排列，可见明显的线粒体，可表明切割得到的切片为正在生长的花粉管尖端，具有可靠的稳定性
一种花粉管尖端超薄切片方法

[发明专利]棉花花粉管游离钙离子的荧光标记方法-CN201010144837.5无效
发明人：岳洁瑜;唐灿明 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2010-04-13 - 公布日： 2010-08-18 - 主分类号： G01N21/64 文献下载
摘要：本发明是棉花花粉管游离钙离子的荧光标记方法，属于生物技术领域。将载玻片打孔做成培养花粉管的小室；将花粉在小室中培养，萌发出花粉管；低温孵育法将Fluo-3AM载入培养好的花粉管中；激光共聚焦扫描显微下观察花粉管的Ca2+动态变化。本发明建立了利用激光共聚焦显微技术研究棉花花粉管Ca2+浓度变化的方法，操作简单，标记效果好，将在棉花花粉管生长以及受精生殖研究中发挥重要作用，有重要的实际应用价值。
棉花花粉管游离离子荧光标记方法

[发明专利]一种从梨花粉管中分离纯化线粒体的方法-CN200810023305.9无效
发明人：张绍铃;王春雷;陈功;吴俊;吴华清 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2008-04-08 - 公布日： 2008-09-17 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明涉及一种梨花粉管中分离和纯化线粒体的方法，属于生物技术领域。包括花粉的采集、培养，线粒体提取液的配制、清洗液的配制、Percoll梯度的配制以及花粉管线粒体分离过程，将培养好的花粉管用细胞筛过滤，添加线粒体提取液研磨，获得细胞质液体，振荡离心后，用Percoll采用本方法获得完整的具有活力的花粉管的线粒体，提高了线粒体分离纯化效率。这种从微量花粉管中分离纯化线粒体技术，适合于作为花粉管的生理生化及细胞遗传等实验材料。对于研究开发花粉管的快速生长、以及不亲和花粉管的生长抑制技术将具有重要意义。
一种梨花粉管中分离纯化线粒体方法

[发明专利]裸子植物花粉管微丝骨架的荧光标记方法及其应用-CN200610012238.1无效
发明人：林金星;陈彤;王玉花 -专利权人：中国科学院植物研究所
申请日： 2006-06-14 - 公布日： 2006-12-27 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开了一种对裸子植物花粉管微丝骨架进行荧光标记的方法及其应用。其目的是提供一种对裸子植物花粉管微丝骨架进行荧光标记的方法以及该方法在裸子植物花粉花粉管微丝骨架的显微镜观测中的应用。该标记方法包括以下步骤：1)将裸子植物花粉管用含2－4％多聚甲醛的40－60mM Pipes缓冲液固定30－60min；2)洗涤花粉管；3)将花粉管置于0.2－0.3％甘油中渗透30－60min；4)洗涤花粉管；5)将花粉管用150－250nM经荧光标记的鬼笔环肽避光染色0.5－1.5h，微丝骨架被荧光标记。本发明具有操作简单，快速，对细胞的损伤小，标记效果好的优点，将在裸子植物花粉管细胞骨架的研究中发挥重要作用，实际应用价值高。
裸子植物花粉管骨架荧光标记方法及其应用

[发明专利]一种花粉管超薄切片及其制备方法-CN202110939459.8有效
发明人：李晓娟;姚小敏;张御格 -专利权人：北京林业大学
申请日： 2021-08-16 - 公布日： 2023-07-07 - 主分类号： G01N1/06 文献下载
摘要：本发明是关于一种花粉管超薄切片及其制备方法，该方法包括：花粉培养；选取花粉管；确认样品方向；固定花粉管；利用1，3‑二氨基硫脲进行锇沉积；块染；脱水；渗透；包埋与聚合；修块与切片。本发明利用纤维毛细管可吸取特定形态的花粉管，提高数量较少体积微小类样品的可操作性以及选择性；将花粉管装入纤维毛细管，有利于包埋时定位花粉管的位置，并在后续切片时对花粉管进行定向；本发明特异性选择样品以及可以对样品进行定向的特点
一种花粉管超薄切片及其制备方法

[发明专利]一种利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法-CN201810798857.0在审
发明人：屈海泳;李坤;马春晖;高超;王永章 -专利权人：青岛农业大学
申请日： 2018-07-19 - 公布日： 2018-11-16 - 主分类号： G01N1/30 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法，属于花粉管加载荧光染料技术领域。所述利用负压渗透在花粉管加载荧光染料的方法，包括如下步骤：步骤1：原料预处理；步骤2：制备Fluo 4‑AM母液；步骤3：制备花粉悬浮液；步骤4：制备Fluo 4‑AM工作液；步骤5：制备加载荧光染料的花粉管本发明在不影响花粉细胞结构和活性的情况下，采用负压渗透及染色剂染色，在低温下对花粉管进行处理，能够对花粉管中钙离子成功染色。
花粉管荧光染料加载负压制备染色花粉悬浮液原料预处理花粉细胞钙离子工作液染色剂母液成功

[发明专利]一种加速花粉管伸长的助剂及其配方-CN202310738988.0在审
发明人：罗术东;王斐然;谢李星 -专利权人：中国农业科学院蜜蜂研究所
申请日： 2023-06-21 - 公布日： 2023-07-25 - 主分类号： A01N63/50 文献下载
摘要：本发明涉及农业技术领域，具体提供一种加速花粉管伸长的助剂及其配方。在本发明所提供的应用中，使用植物免疫蛋白作为花粉管伸长的助剂。在液体花粉中，植物免疫蛋白的溶液中的含量为0.02‑3.3g/L之间。本发明将得到的液体花粉喷施在目标植物花朵的柱头上，以此来加速花粉管的伸长，缩短花粉管到达子房的时间，加速花朵的受精。本发明提供的含有植物免疫蛋白的助剂，能很好促进花粉管的生长，并且来源简单、安全环保。本发明首次将植物免疫蛋白应用于花粉管的伸长，拓宽了促进花粉管伸长的应用领域，适于推广应用。
一种加速花粉管伸长助剂及其配方

[发明专利]一种提取梨花粉管质膜的方法-CN201911110343.2有效
发明人：高永彬;徐凯;楼宇航;郑伟尉;吴伯萍;冯心怡 -专利权人：浙江农林大学
申请日： 2019-11-14 - 公布日： 2021-04-30 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明公开一种提取梨花粉管质膜的方法，包括如下步骤：(1)采集梨花粉；(2)培养花粉长出花粉管；(3)花粉管质膜的提取：采用圆台形钢丝网研钵一步过滤收集花粉管，同时使用玻璃研棒对花粉管进行破壁，剥离质膜组分随着提取液通过研钵底部钢丝网孔过滤至预冷烧杯中经上述系列步骤提取纯化后的梨花粉管质膜组分没有液泡及内质网等膜组分污染，几乎没有细胞质及线粒体等组分污染，可用于后续花粉管质膜蛋白质组及相关酶活性等研究，对于研究梨花粉管生长发育调控具有重要意义。
一种提取梨花质膜方法

[发明专利]一种标记植物花粉微丝微管细胞骨架的方法及其试剂盒-CN201710081736.X有效
发明人：李天忠;杨清;顾钊宇;李威;李洋;于杰;刘春生 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2017-02-15 - 公布日： 2020-06-16 - 主分类号： C12N5/04 文献下载
摘要：本发明提供一种用于标记植物花粉微丝微管细胞骨架的试剂盒，包括花粉固定液试剂A，花粉洗涤液试剂B，花粉微丝染料试剂组合C，以及花粉微管染料试剂组合D。本发明还提供利用该试剂盒标记植物花粉微丝微管细胞骨架的方法，具体流程如下：培养花粉—固定花粉管—洗涤花粉管—微丝染料室温染色花粉管—微管染料室温染色花粉管—激光共聚焦显微镜观察。本方法可实现快速、灵敏、准确性高、简便地观察木本植物花粉管内微丝微管骨架结构与排列方式，为直观观察木本植物花粉管内微丝微管骨架结构与排列方式提供技术支持。
一种标记植物花粉微管细胞骨架方法及其试剂盒

[实用新型]花粉授精过程动态演示器-CN201220681002.8有效
发明人：傅嘉长;李佳琦;薛泽洋 -专利权人：麻阳苗族自治县第一中学
申请日： 2012-12-11 - 公布日： 2013-06-12 - 主分类号： G09B23/38 文献下载
摘要：本实用新型公开了一种花粉授精过程动态演示器，它包括一花粉受精过程图的写真板，图中花粉管处理成空白，所述写真板覆盖在夹板上，夹板覆盖在泡沫板上，在夹板和泡沫板对应花粉管的位置开槽，其中泡沫板上的槽略宽于夹板上的槽，在泡沫板的槽中嵌入胶管，胶管尾部用绳子与一个极低速度的电机连接，电机发动时转动绳子带动胶管移动。本实用新型的演示完全符合花粉受精的科学原理，当花粉落在柱头上时，在柱头黏液的刺激下开始萌发，长出花粉管，已经长成的那部分花粉管不再向下移动，只有花粉管的前端，接着不断往下长，直到长进子房。同时花粉管中的精子也随着花粉管的伸长而向下移动，最终进入胚珠内部。
花粉授精过程动态演示

[发明专利]一种睡莲授粉后花粉管与胚珠的显微方法以及光学显微压片制作方法-CN202110618270.9在审
发明人：唐毓玮;李佳慧;毛立彦;於艳萍;龙凌云;黄秋伟;苏群;黄歆怡;谢振兴;宾振钧;丁丽琼;池昭锦;罗清;覃茜;陆祖正 -专利权人：广西壮族自治区亚热带作物研究所（广西亚热带农产品加工研究所）
申请日： 2021-06-01 - 公布日： 2021-08-27 - 主分类号： G01N1/28 文献下载
摘要：本发明涉及植物显微技术领域，具体是一种睡莲授粉后花粉管与胚珠的显微方法以及光学显微压片制作方法。本申请制作得到睡莲授粉后花粉管与胚珠的光学显微压片，可以在光学显微镜下观察，花粉管呈深蓝色(近似黑色)，能清晰看到花粉管在睡莲雌蕊中的生长情况，包括授粉后花粉管的生长途径与镜检区域的胚珠数量。该压片无需在荧光显微镜下观察雌蕊中的花粉管与胚珠，仅仅依靠光学显微镜即可，极大的降低了观测成本。
一种睡莲授粉花粉管胚珠显微方法以及光学压片制作方法

[发明专利]裸子植物花粉管微管骨架的免疫荧光标记方法及其应用-CN200710117755.X无效
发明人：林金星;王晓华;盛仙永 -专利权人：中国科学院植物研究所
申请日： 2007-06-22 - 公布日： 2007-11-21 - 主分类号： G01N33/533 文献下载
摘要：本发明公开了一种裸子植物花粉管微管骨架的免疫荧光标记方法及其应用。该方法包括以下步骤：1)将裸子植物花粉管用浓度为3－5g多聚甲醛/100ml 40－60mM Pipes缓冲液的固定液固定40－60min；2)洗涤花粉管；3)将花粉管置于浓度为0.5－1.2g果胶酶和纤维素酶/100ml水的酶溶液中，在20－30℃下酶解30－40min；4)洗涤花粉管；5)将花粉管置于体积/体积百分比浓度为0.5－1％的Triton X－100中渗透1－3h；6)洗涤花粉管；7)加入作为一抗的抗β－tubulin单克隆抗体孵育1－3h；8)洗涤花粉管；9)加入与一抗特异结合的荧光标记的二抗避光孵育1－3h，微管骨架被免疫荧光标记。本发明将在裸子植物花粉管细胞骨架的研究中发挥重要作用，实际应用价值高。
裸子植物花粉管微管骨架免疫荧光标记方法及其应用

[实用新型]一种果树专用的授粉棒装置-CN202321389866.7有效
发明人：胡玉净;吴昊凡;陈丽;赵雪;刘荣欣;肖蓉;张也;杨冰;姚允聪 -专利权人：北京农学院
申请日： 2023-06-02 - 公布日： 2023-10-13 - 主分类号： A01H1/02 文献下载
摘要：本实用新型涉及一种果树专用的授粉棒装置，该授粉棒装置包括：花粉管、底座和棉棒，所述花粉管内装有花粉，所述底座插置在花粉管的底端，并能够沿花粉管的轴线移动，所述棉棒插置在底座上，花粉管的顶端设置有所述棉棒的进出口本实用新型通过推出棉棒进行授粉，收回棉棒吸附花粉的方式，提高了授粉的工作效率，减少了花粉的浪费，结构简单，制作成本低，便于更换棉棒，具有广泛应用的前景。
一种果树专用授粉装置

[发明专利]一种从花粉管中提取纤维素的方法-CN202011370534.5有效
发明人：吴巨友;李贤;谢智华;汤超;王鹏;张绍铃;曹鹏;邱赵萍;朱晓璇 -专利权人：南京农业大学
申请日： 2020-11-30 - 公布日： 2022-05-27 - 主分类号： G01N1/34 文献下载
摘要：本发明公开了一种从梨花粉管中提取纤维素的方法。该方法通过体外培养花粉，对花粉管纤维素的粗提取、有机试剂对纤维素的纯化、蒽酮比色法测定纤维素含量定。通过本发明的方法，对于研究花粉管的生长、花粉管细胞壁组成成分含量、细胞骨架、纤维素合成酶的翻译后修饰、转录因子调控、外界环境因素及激素等方面的因素影响下花粉管细胞壁纤维素对应含量变化具有重要意义。同时本发明中所涉及到的花粉管提取纤维素的方法可用于其他蔷薇科植物，其他不同品种可以借鉴使用。
一种花粉管提取纤维素方法

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