本发明公开了一套基于忽地笑转录组序列开发的EST‑SSR分子标记,包括20对引物,其核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.1~40所示。本发明的20对EST‑SSR标记的引物根据转录组序列设计,并通过基因组DNA扩增测序验证为明确的SSR标记,具有多态性丰富、扩增稳定、重复性好、共显性和易于检测等优点,能够更好的区分忽地笑遗传种质的多样性本组标记填补了忽地笑特异共显性标记的缺乏,可用于忽地笑种质资源遗传多样性、品种纯度鉴定、品种遗传系谱分析和辅助育种等领域,可以大大促进忽地笑种质资源的研究和应用开发。