本发明涉及一种pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒、构建方法及其应用,包括:pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒,在pEGFP‑N1质粒中,含有CXXC4核苷酸序列,序列如SEQ ID NO:1所示;构建该质粒需要使用含有ECORI和BamHI酶切位点的CXXC4扩增引物,引物序列分别如SEQ ID NO:2和SEQ ID NO:3所示;pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒的构建方法;pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒在制备GBM靶向治疗生物制剂中的应用。使用带有ECORI和BamHI酶切位点的CXXC4扩增引物,可以高效、简便地构建带有CXXC4基因的pEGFP‑N1‑CXXC4重组表达质粒;基于pEGFP‑N1‑CXXC4真核表达质粒制备的靶向治疗生物制剂