本发明属于遗传工程和蛋白质工程领域,具体涉及一种获得高产量鹅型溶菌酶的方法。本发明提供了一种获得高产量鹅型溶菌酶的方法,即将序列如SEQ ID NO.1所示的DNA序列装入真核表达载体,并在毕赤酵母中发酵表达。本发明对人鹅型溶菌酶的基因序列进行了改造,从而使溶菌酶发酵产量明显增加。利用本发明的制备方法获得溶菌酶,生产效率明显提高,成本降低,为大批量生产溶菌酶及其下游工业化应用奠定了基础。
本发明公开了一种密码子优化的斑马鱼g型溶菌酶‑1基因及其重组表达蛋白。斑马鱼共有三个溶菌酶基因,分别为c型溶菌酶、g1型溶菌酶和g2型溶菌酶。所述的斑马鱼g型溶菌酶‑1基因系通过优选获得,经密码子优化后采用全基因合成的方式获得,其核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示,其编码的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示。该基因与载体pET‑28a(+)连接,获得重组质粒28a‑Lys‑g1,进一步转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经诱导表达、纯化及SDS‑PAGE验证,经复性,获得高纯度、高溶菌活性的斑马鱼g型溶菌酶