本发明公开了可同时检测牛病毒性腹泻病毒、轮状病毒、冠状病毒的三重RT‑PCR方法及应用,包括以下步骤:以牛淋巴结、肠道黏膜和病毒的RNA为RNA模板,以牛病毒性腹泻病毒(SEQ ID NO.1,187bp)、牛轮状病毒(SEQ IDNO.2,391bp)、牛冠状病毒(SEQ ID NO.3,725bp)三种病毒的遗传特征设计了特异性上游引物和特异性下游引物作为特异性引物,进行RT‑PCR扩增得到扩增产物,检测结果,判断待测样品中是否含有牛病毒性腹泻病毒、牛轮状病毒、牛冠状病毒。本发明特异、敏感、快速、可同时检测BVDV、BRV和BCoV3种RNA病毒的多重RT‑PCR检测方法。