本发明提供了一种核心链霉亲和素及其制备方法及应用,所述核心链霉亲和素的氨基酸序列如SEQ ID NO:1所示,和/或核心链霉亲和素可通过先利用重组细菌表达链霉亲和素,然后利用固定酶化技术对链霉亲和素进行酶切得到本发明的核心链霉亲和素与生物素结合时具有较高的活性且活性稳定性好,核心链霉亲和素的制备方法简单且制备得到的核心链霉亲和素中CSA纯度高。本发明的核心链霉亲和素及其制备方法可以在酶联免疫吸附实验、免疫组织化学、时间分辨免疫荧光技术、化学发光、定量PCR、单链DNA制备、生物分子纯化、单克隆抗体制备中应用;尤其是在制备丙型肝炎病毒抗体检测试剂盒中应用