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[发明专利]一种基于禽类腺相关病毒的基因打靶载体及其构建方法-CN200910025759.4无效
发明人：徐世永;刘红林 -专利权人：金陵科技学院;刘红林;徐世永
申请日： 2009-03-09 - 公布日： 2009-08-12 - 主分类号： C12N15/861 文献下载
摘要：本发明公开一种基于禽类腺相关病毒的基因打靶载体及其构建方法，该载体是以禽类腺相关病毒为骨架，在5′、3′LTR内侧各接入1个同源臂，在这2个同源臂之间接入正选抗性基因组件，在正选抗性基因组件及同源臂之间各加入了一个绝缘子元件该构建方法包括(1)禽类腺相关病毒的基因转移载体的构建；(2)构建pMD19-2HS4质粒；(3)OV全序列扩增；(4)基因打靶载体各组件的扩增及PCR拼接；(5)基因打靶载体的构建。本发明的基因打靶载体，能有效抑制基因打靶过程中的位置效应，提高阳性克隆筛选效率，同时还能抑制随机整合，提高阳性克隆同源重组效率。对于非活性基因或时空特异表达基因有较高的基因导入效率。
一种基于禽类相关病毒基因打靶载体及其构建方法

[发明专利]一种利用基因打靶技术制备哺乳动物乳腺生物反应器的方法-CN200510055256.3无效
发明人：袁三平;张义静;鲜建 -专利权人：青岛森淼生物技术研究所
申请日： 2005-03-17 - 公布日： 2006-02-08 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种利用基因打靶技术制备哺乳动物乳腺生物反应器的方法，包括下列步骤：1.将医用蛋白基因、Lox序列、Ploy(A)信号、筛选基因和lox序列构建到哺乳动物的乳蛋白基因的表达框架中，构建基因打靶载体；2.转化受体细胞并筛选；3.通过PCR和Southern分析，获得基因打靶的细胞株；4.基因打靶的细胞株的细胞核移植，获得基因打靶克隆动物；5.基因打靶动物的扩繁；6.将Cre蛋白质转入基因打靶羊的受精卵中或体细胞即再克隆，获得没有筛选基因的基因打靶动物；7.利用Cre－lox和IRES序列的特点，将第二个医用蛋白基因加到基因打靶动物中，获得能合成两个医用蛋白基因的基因打靶生物反应器。
一种利用基因打靶技术制备哺乳动物乳腺生物反应器方法

[发明专利]人抗凝血酶Ⅲ基因在崂山奶山羊乳腺中表达的方法-CN201110252195.5无效
发明人：袁三平;邹贤刚 -专利权人：青岛森淼实业有限公司
申请日： 2011-08-30 - 公布日： 2011-12-28 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明属于基因工程领域，具体涉及一种利用基因打靶技术，使人抗凝血酶III基因在崂山奶山羊乳腺中表达的方法。本法构建的基因打靶载体，通过同源重组将人源性抗凝血酶III基因定点整合入崂山奶山羊胎儿成纤维细胞株基因组上某一确定的位点，克服了随机整合的盲目性和危险性，并且基因打靶载体的表达量高于转基因的表达量(大约高2～10倍)；在人源性抗凝血III基因的后面加上牛生长激素基因的poly(A)信号，有助于基因打靶载体在第一代克隆崂山奶山羊的乳腺中表达人抗凝血酶III基因；本基因打靶载体中有两个相同方向的lox序列，便于将来工作中除去筛选基因，以最终使人抗凝血酶III基因在崂山奶山羊体内高效表达。
抗凝基因崂山山羊乳腺表达方法

[发明专利]基于腺相关病毒的山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒的构建及其打靶方法-CN201110350437.4无效
发明人：肖磊;赵金龙 -专利权人：中国科学院上海生命科学研究院
申请日： 2011-11-08 - 公布日： 2013-05-08 - 主分类号： C12N15/864 文献下载
摘要：本发明公开了一种基于腺相关病毒为载体的山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒及其构建方法。本发明还公开了所述山羊β-乳球蛋白基因打靶质粒的打靶方法。
基于相关病毒山羊球蛋白基因打靶质粒构建及其方法

[发明专利]一种筛选标记自我删除的基因打靶载体及方法-CN201811472019.0在审
发明人：琚存祥;赵静;张明坤;陶裴裴;李松;侯欢欢;高翔 -专利权人：江苏集萃药康生物科技有限公司
申请日： 2018-12-03 - 公布日： 2019-03-22 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种筛选标记自我删除的基因打靶载体及方法，涉及基因修饰技术领域，该基因打靶载体包括如下元件：重组位点1、生殖特异性启动子、重组酶基因、筛选标记启动子、筛选标记基因和重组位点2；其中，生殖特异性启动子选自Prm1基因启动子、Ddx4基因启动子、Stra8基因启动子、AMHR基因启动子或Zp3基因启动子。使用该基因打靶载体修饰目的基因，在制备动物模型的过程中，筛选标记可在F1代自我删除，获得不带筛选标记的F1代，可减少将F1代再与表达重组酶的动物交配以删除筛选标记的步骤，节省了基因打靶去除筛选标记的时间
筛选标记基因打靶载体基因启动子删除特异性启动子重组位点启动子生殖筛选标记基因重组酶基因基因打靶基因修饰目的基因制备动物重组酶交配去除修饰

[发明专利]一种通过基因打靶技术生产人血清白蛋白的载体及方法-CN201510158978.5在审
发明人：李宁;李向清;李秋艳;温啸;李燕;宋慧霞;李志远;张佳;张在虎;张久明 -专利权人：中国农业大学
申请日： 2015-04-03 - 公布日： 2015-07-22 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明提供了一种基因打靶载体，所述基因打靶载体包括人血清白蛋白基因、正筛选基因、负筛选基因和猪血清白蛋白基因的5’同源臂和3’同源臂，其中，所述正筛选基因的两端具有重组酶识别序列。利用本发明所提供的打靶载体可以实现基因打靶克隆猪纯合子的血液中只表达人血清白蛋白，不表达猪自身的血清白蛋白，利于后续从猪的血液中高效分离纯化人血清白蛋白；从而为利用猪的血液作为生物反应器生产人血清白蛋白的研究和产业化应用提供支持
一种通过基因打靶技术生产血清白蛋白载体方法

[发明专利]在水稻基因打靶中识别特异位点的PL‑LbCpf1‑RVR基因及其应用-CN201710505886.9在审
发明人：秦瑞英;杨剑波;许蓉芳;李浩;李莉;魏鹏程;李娟 -专利权人：安徽省农业科学院水稻研究所
申请日： 2017-06-28 - 公布日： 2017-08-29 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明提供了一种在水稻基因打靶中识别特异位点的PL‑LbCpf1‑RVR基因及其应用。本发明在水稻基因打靶实验过程中，意外获得了一种新的PL‑LbCpf1‑RVR基因，发现利用该PL‑LbCpf1‑RVR基因进行水稻剪切，能够识别特异位点，并且能够识别更多基因组位点。并且本发明提供一种基于该基因构建的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用所获得的PL‑LbCpf1‑RVR构建植物表达载体，构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切，实现了水稻基因打靶，并且以高突变效率获得转基因水稻植株。
水稻基因打靶识别特异 pl lbcpf1 rvr 及其应用

[发明专利]在基因打靶中具有高突变效率的PL‑LbCpf1‑RR基因及其应用-CN201710505888.8在审
发明人：魏鹏程;杨剑波;许蓉芳;李浩;李莉;秦瑞英;李娟 -专利权人：安徽省农业科学院水稻研究所
申请日： 2017-06-28 - 公布日： 2017-09-08 - 主分类号： C12N15/55 文献下载
摘要：本发明提供了一种在基因打靶中具有高突变效率的PL‑LbCpf1‑RR基因及其应用。本发明在水稻基因打靶实验过程中，意外获得了一种新的PL‑LbCpf1‑RR基因，发现利用该PL‑LbCpf1‑RR基因进行水稻剪切，能够识别更多基因组位点并且具有高突变效率。此外，并且本发明提供一种表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用所获得的PL‑LbCpf1‑RR构建植物表达载体，构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切，实现了水稻基因打靶，并且获得了高突变效率。
基因打靶具有突变效率 pl lbcpf1 rr 及其应用

[发明专利]一种小鼠核糖体基因区打靶载体及其构建方法-CN201410442448.9有效
发明人：梁德生;李卓;邬玲仟 -专利权人：中南大学;湖南家辉生物技术有限公司家辉遗传专科医院
申请日： 2014-09-02 - 公布日： 2014-12-24 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了提供一种小鼠核糖体基因区打靶载体及其构建方法。所述小鼠核糖体基因区打靶载体中含有如SEQ ID NO.1所示的同源臂序列。本发明在核糖体基因区较高的同源重组效率基础上，旨在针对核糖体基因区位点，利用本发明有效地将目的基因打靶到小鼠不同类型细胞的核糖体基因区，再通过启动子陷阱策略富集基因打靶阳性克隆，此外Loxp序列的引入可以实现之后不同基因在打靶位置高效替换本发明后续主要应用小鼠胚胎干细胞的核糖体基因区打靶，再最终建立核糖体基因区打靶的小鼠模型，为验证以核糖体基因区基因打靶的有效性、生物安全性提供基础。
一种小鼠核糖体基因打靶载体及其构建方法

[发明专利]一种在水稻基因打靶中识别特异位点的SpCas9-NRRH突变体及其应用-CN202011481713.6有效
发明人：李娟;许蓉芳;秦瑞英;刘小双;单调风;魏鹏程 -专利权人：安徽省农业科学院水稻研究所
申请日： 2020-12-14 - 公布日： 2022-04-01 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了一种在水稻基因打靶中识别特异位点的SpCas9‑NRRH基因及其应用。本发明在水稻基因打靶实验过程中，意外获得了一种新的SpCas9‑NRRH突变体，发现利用该SpCas9‑NRRH突变体进行水稻剪切，能够识别特异位点。并且本发明提供一种基于该基因构建的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用所获得的SpCas9‑NRRH构建植物表达载体，构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切，实现了水稻基因打靶，并且以高突变效率获得转基因水稻植株。
一种水稻基因打靶识别特异 spcas9 nrrh 突变体及其应用

[发明专利]在水稻基因打靶中识别特异位点的SpCas9-NRCH突变体及其应用-CN202011481714.0有效
发明人：李娟;许蓉芳;秦瑞英;刘小双;周桂林;范家萌;单调风;魏鹏程 -专利权人：安徽省农业科学院水稻研究所;合肥丰乐种业股份有限公司
申请日： 2020-12-14 - 公布日： 2022-04-01 - 主分类号： C12N9/22 文献下载
摘要：本发明提供了一种在水稻基因打靶中识别特异位点的SpCas9‑NRCH突变体及其应用。本发明在水稻基因打靶实验过程中，意外获得了一种新的SpCas9‑NRCH突变体，发现利用该SpCas9‑NRCH基因进行水稻剪切，能够识别特异位点。并且本发明提供一种基于该基因构建的表达盒和一种表达载体，以及该表达盒和表达载体在水稻基因编辑方面的应用。本发明利用所获得的SpCas9‑NRCH构建植物表达载体，构建水稻打靶载体，导入水稻细胞后造成水稻特异基因位点的DNA双链剪切，实现了水稻基因打靶，并且以高突变效率获得转基因水稻植株。
水稻基因打靶识别特异 spcas9 nrch 突变体及其应用

[发明专利]鱼类肌肉生长抑素MSTN基因克隆及其基因打靶载体构建-CN200510104768.4无效
发明人：陈松林;叶寒青;沙珍霞 -专利权人：中国水产科学研究院黄海水产研究所
申请日： 2005-12-30 - 公布日： 2006-09-13 - 主分类号： C12P19/34 文献下载
摘要：一种鱼类肌肉生长抑素MSTN基因及其基因打靶载体，它的方法是分离克隆了花鲈MSTN基因，其全长为4873bp，包括3个外显子，2个内含子，5’调控序列和非翻译区以及3’非翻译区。根据测定出的花鲈MSTN基因序列，设计引物，扩增得到该基因的一个3.2KB的长片段和一个1.5KB的短片段，将这两个片段依次连接到pBSII⁺KS载体上，获得重组载体p+MSTN3.2+MSTN1.5，然后将正选择标记基因neo片段连接到上述MSTN基因长片段和短片段的中间，形成p+MSTN3.2+MSTN1.5+neo的重组载体；最后将负选择标记基因SVTK－tk片段连接到上述长片段的侧翼，最后获得p+MSTN3.2+MSTN1.5+neo+tk的基因打靶载体。本发明克隆了鱼类MSTN全长基因，并首次构建了鱼类MSTN基因打靶载体，可用于各种鱼类MSTN基因克隆及基因打靶载体的构建，在鱼类基因工程育种上具有重要应用价值。
鱼类肌肉生长 mstn 基因克隆及其打靶载体构建

[发明专利]通用型基因打靶载体-CN201510118781.9有效
发明人：毕延震;郑新民;华再东;任红艳;张立苹;刘西梅;华文君;李莉;肖红卫;魏庆信 -专利权人：湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
申请日： 2015-03-18 - 公布日： 2021-05-14 - 主分类号： C12N15/85 文献下载
摘要：本发明公开了一种通用型基因打靶载体，属于生物工程领域。该通用型基因打靶载体使用新霉素磷酸转移酶和EGFP为正选择标记，DsRed为负选择标记；正选择标记基因表达框的两侧各含有1个同向排列的LoxP位点；在LoxP位点附近各含有一段由稀有限制性内切酶位点组成的多克隆位点，便于基因打靶臂的克隆。该载体含有2个归巢限制性内切酶位点，分别为I‑CeuI和I‑SceI，可作为通用酶切位点将该载体线性化。本发明提供的通用型基因打靶载体，不仅具备单药物和双荧光筛选功能，而且其含有的LoxP位点可介导选择标记的高效删除反应，这为动物安全转基因技术提供了新材料，具有重要的应用前景。
通用型基因打靶载体

[发明专利]一种基因打靶用中间载体及其制备方法和用途-CN200710050165.X无效
发明人：周钦;胡忠国;吕小岩;张铮;魏于全 -专利权人：四川大学华西医院
申请日： 2007-09-29 - 公布日： 2009-04-01 - 主分类号： C12N15/63 文献下载
摘要：本发明属于生物技术领域，具体地涉及一种基因打靶用中间载体及其制备方法和用途。基因打靶用中间载体含有两个loxp位点序列和两端各连接一个frt位点序列的阳性筛选基因。本发明从构建打靶载体的根本出发，在以往实验方法的基础上，首次开发出了一种能用于基因敲除打靶载体构建的中间载体。由于该载体具有普遍、通用的使用价值，可以运用到现阶段几乎所有类型的基因敲除打靶载体构建系统，而且简化构建打靶载体的实验路线，易化实验的操作，减少试验出错的几率；节约时间，降低成本，相对于现有技术都有很明显的优点
一种基因打靶中间载体及其制备方法用途

[发明专利]基因打靶方法-CN201510220631.9有效
发明人：姜有为;李云飞 -专利权人：杭州菁因康生物科技有限公司
申请日： 2015-04-30 - 公布日： 2020-12-29 - 主分类号： C12N15/11 文献下载
摘要：本发明提供一种新型的两步基因打靶方法以及用于基因打靶的核苷酸构建物，所述方法能提高基因打靶效率和精确鉴定靶基因敲除株。本发明方法包括首先通过同源重组用打靶盒高效替换基因组中的靶基因，所述打靶盒由靶基因活性变异体、标记基因和位点特异性重组位点构成。然后通过重组酶切除打靶盒，在靶基因上留下一个位点特异性重组位点而产生靶基因敲除株。本发明还包括利用重组酶表达载体中的反选择标记除去敲除株中的重组酶表达载体。本发明方法可以利用所有机体细胞中内源性的同源重组过程，因此，可以用于改造机体的任何基因。
基因打靶方法

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