本发明公开了编码β-半乳糖苷酶的基因及其表达和应用。本发明从采自新疆的土壤中筛选克隆了一个来源于纤维单胞菌属(Cellulomonassp.)的β-半乳糖苷酶新基因(SEQ ID NO：1)。该β-半乳糖苷酶基因组DNA全长2076bp，(G+C)％含量72.9％，推导其编码692个氨基酸。该基因所编码的β-半乳糖苷酶与来源于节杆菌属的β-半乳糖苷酶相似性最高，为59％。酶学性质测定表明，本发明β-半乳糖苷酶为中性常温酶。文献报道的其他节杆菌属(Arthrobacter sp.)的β-半乳糖苷酶大多属低温适冷酶，在酶学性质上与本发明的β-半乳糖苷酶存在着显著差异。
本发明涉及一种β‑半乳糖苷酶及其在乳糖降解中的应用。所述β‑半乳糖苷酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的β‑半乳糖苷酶Gal39为结构与功能新颖的乳糖水解酶，其氨基酸序列与已有性质报道的β‑半乳糖苷酶序列相似度仅为79.28％，是一个新酶。本发明所述的β‑半乳糖苷酶产量可达366.2U/mL,最适反应温度为40℃，最适反应PH为7.5。本发明所述的β‑半乳糖苷酶具有耐热性，在60℃下孵育1小时仍保持56.2％的酶活性。本发明所述的β‑半乳糖苷酶产量大，稳定性好，具有优良的工业化应用潜质。
本发明涉及一种β‑半乳糖苷酶及其应用，该β‑半乳糖苷酶来自发酵乳杆菌Lactobacillusfermentum 9‑4，所述β‑半乳糖苷酶的基因，由编码α亚基的基因和编码β亚基的基因组成，所述编码α亚基的基因的核苷酸序列如所述的β‑半乳糖苷酶基因编码的β‑半乳糖苷酶，由α亚基和β亚基组成，该酶的α亚基的氨基酸序列如SEQ ID NO.3所示，所述β亚基的氨基酸序列如SEQID NO.4所示。本发明的β‑半乳糖苷酶具有高转糖苷活性，能够应用于半乳糖基寡糖的酶法生产，尤其是β‑半乳糖苷酶在合成半乳糖基海藻糖中的应用。
本发明涉及一种耐热β‑半乳糖苷酶及其在乳糖降解的应用。所述β‑半乳糖苷酶氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。本发明的β‑半乳糖苷酶Gal‑T为结构与功能新颖的乳糖水解酶，其氨基酸序列与已有性质报道的β‑半乳糖苷酶序列相似度仅为75.75％，是一个新酶。本发明所述的β‑半乳糖苷酶产量可达460.4U/mL,最适反应温度为45℃，最适反应PH为7.5。本发明所述的β‑半乳糖苷酶具有耐热性，在40℃‑60℃的温度范围内显示出广泛的温度稳定性。本发明所述的β‑半乳糖苷酶产量大，热稳定性好，具有优良的工业化应用潜质。
本发明公开了一种新的α－半乳糖苷酶基因、其编码蛋白及其制备方法和用途。本发明首先从青霉(Penicillium sp.)F63(CGMCC No.1669)中分离纯化出α－半乳糖苷酶，再分离、克隆得到编码该酶的基因(SEQ ID NO：1或SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列此外，本发明还公开了制备该α－半乳糖苷酶的方法，包括：构建含有SEQ ID NO：1所示的核苷酸序列的重组表达质粒；培养用该重组表达质粒所转化的宿主细胞，得重组菌株；培养该重组菌株，诱导重组α－半乳糖苷酶的表达，回收并纯化所表达的α－半乳糖苷酶。通过核苷酸和氨基酸序列比较，该α－半乳糖苷酶为一新的α－半乳糖苷酶。试验证实，本发明α－半乳糖苷酶能够较好的水解大豆中棉子糖和水苏糖，可应用于饲料和食品工业。
